Iyapa ati ìwẹnumọ ti awọn ọlọjẹ jẹ lilo pupọ ni iwadii biochemistry ati ohun elo ati pe o jẹ ọgbọn iṣẹ ṣiṣe pataki. Aṣoju sẹẹli eukaryotic le ni ẹgbẹẹgbẹrun awọn ọlọjẹ oriṣiriṣi ninu, diẹ ninu jẹ ọlọrọ pupọ ati diẹ ninu awọn adakọ diẹ nikan ni. Lati le ṣe iwadi kan patoamuaradagba, o jẹ dandan lati kọkọ sọ di mimọ lati awọn ọlọjẹ miiran ati awọn ohun elo ti kii ṣe amuaradagba.

1. Salting-jade ọna tiamuaradagba:

Iyo didoju ni ipa pataki lori solubility ti amuaradagba. Ni gbogbogbo, pẹlu ilosoke ti ifọkansi iyọ labẹ ifọkansi iyọ kekere, solubility ti amuaradagba pọ si. Eyi ni a npe ni iyọ; nigbati ifọkansi iyọ ba tẹsiwaju lati pọ si, Solubility ti amuaradagba dinku si awọn iwọn ti o yatọ ati ti o ya sọtọ lẹhin ekeji. Yi lasan ni a npe ni salting jade.

2. Ọna stacking Isoelectric ojuami:

Idojukọ elekitiroti laarin awọn patikulu jẹ eyiti o kere julọ nigbati amuaradagba jẹ aimi, nitorinaa solubility tun jẹ eyiti o kere julọ. Awọn aaye isoelectric ti awọn ọlọjẹ oriṣiriṣi yatọ. pH ti ojutu ifunmọ le ṣee lo lati de aaye isoelectric ti amuaradagba Ṣe ki o ṣajọpọ, ṣugbọn ọna yii kii ṣọwọn lo nikan ati pe o le ni idapo pẹlu ọna iyọ-jade.

3.Dialysis ati ultrafiltration:

Dialysis nlo awọ ara ologbele-permeable lati ya awọn ọlọjẹ ti o yatọ si titobi molikula. Ọna ultrafiltration nlo titẹ giga tabi agbara centrifugal lati jẹ ki omi ati awọn ohun elo solute kekere miiran kọja nipasẹ awọ ara ologbele-permeable, lakoko tiamuaradagbasi maa wa lori awo ilu. O le yan awọn titobi pore oriṣiriṣi lati da awọn ọlọjẹ ti awọn iwuwo molikula oriṣiriṣi.

4.Gel sisẹ ọna:

Tun npe ni kiromatogirafi iyasoto iwọn tabi kiromatogirafi sieve molikula, eyi jẹ ọkan ninu awọn ọna ti o wulo julọ fun yiya awọn akojọpọ amuaradagba ni ibamu si iwọn molikula. Awọn ohun elo iṣakojọpọ ti o wọpọ julọ ni ọwọn jẹ gel glucose (Sephadex ged) ati gel agarose (gel agarose).

5.Electrophoresis:

Labẹ ipo pH kanna, ọpọlọpọ awọn ọlọjẹ le yapa nitori awọn iwuwo molikula ti o yatọ ati awọn idiyele oriṣiriṣi ni aaye ina. O tọ lati san ifojusi si isoelectric ṣeto electrophoresis, eyiti o nlo ampholyte kan bi gbigbe. Lakoko electrophoresis, ampholyte ṣe agbekalẹ pH gradient diẹdiẹ lati inu elekiturodu rere si elekiturodu odi. Nigbati amuaradagba pẹlu idiyele kan ba we ninu rẹ, yoo de ọdọ ara wọn. Ipo pH ti aaye itanna jẹ dawọ, ati pe ọna yii le ṣee lo lati ṣe itupalẹ ati ṣeto awọn ọlọjẹ lọpọlọpọ.

6.Ion ibaraẹnisọrọ kiromatogirafi:

Awọn aṣoju ibaraẹnisọrọ ion pẹlu awọn aṣoju ibaraẹnisọrọ cationic (gẹgẹbi carboxymethyl cellulose; CM-cellulose) ati awọn aṣoju ibaraẹnisọrọ anionic (diethylaminoethyl cellulose). Nigbati o ba n kọja nipasẹ iwe chromatography ibaraẹnisọrọ ion, amuaradagba pẹlu idiyele idakeji si oluranlowo ibaraẹnisọrọ ion ti wa ni ipolowo lori oluranlowo ibaraẹnisọrọ ion, ati lẹhinna adsorbed.amuaradagbati wa ni eluted nipa yiyipada pH tabi ionic agbara.

7.Kromatografi ijora:

Kromatografi ijora jẹ ọna ti o wulo pupọ fun yiya awọn ọlọjẹ. Nigbagbogbo o nilo igbesẹ kan nikan lati ya awọn amuaradagba kan sọtọ lati sọ di mimọ lati adalu amuaradagba idoti pẹlu mimọ giga.

Ọna yii da lori pato kuku ju isomọ covalent ti awọn ọlọjẹ kan si moleku miiran ti a pe ni ligand (Ligand).

Ilana ipilẹ:

awọn ọlọjẹ wa ninu adalu idoti ninu awọn sẹẹli tabi awọn sẹẹli, ati pe iru sẹẹli kọọkan ni ẹgbẹẹgbẹrun awọn ọlọjẹ oriṣiriṣi. Nitorinaa, iyatọ laarin awọn ọlọjẹ jẹ apakan pataki ti biochemistry, ati pe kii ṣe nikan. Tabi ṣeto awọn ọna ti a ti ṣetan le yọ eyikeyi iru amuaradagba kuro lati inu amuaradagba ti o dapọ, nitorina awọn ọna pupọ ni igbagbogbo lo ni apapọ.