Axit nucleic được chia thành axit deoxyribonucleic (DNA) và axit ribonucleic (RNA), trong đó RNA có thể được chia thành RNA ribosome (rRNA), RNA thông tin (mRNA) và RNA chuyển (tRNA) theo các chức năng khác nhau.

DNA chủ yếu tập trung ở nhân, ty thể và lục lạp, trong khi RNA chủ yếu phân bố ở tế bào chất.

Bởi vì bazơ purine và bazơ pyrimidine có liên kết đôi trong axit nucleic nên axit nucleic có đặc tính hấp thụ tia cực tím. Độ hấp thụ tia cực tím của muối natri DNA là khoảng 260nm, và độ hấp thụ của nó được biểu thị bằng A260, và nó nằm ở máng hấp thụ ở bước sóng 230nm, do đó có thể sử dụng phương pháp quang phổ tia cực tím. Axit nucleic được xác định định lượng và định tính bằng máy đo độ sáng.

Axit nucleic là chất ampholyte, tương đương với polyaxit. Axit nucleic có thể được phân tách thành anion bằng cách sử dụng chất đệm trung tính hoặc kiềm và đặt trong điện trường để di chuyển về phía cực dương. Đây là nguyên tắc của điện di.

Nguyên tắc và yêu cầu của quá trình chiết và tinh chế axit nucleic

1. Đảm bảo tính toàn vẹn của cấu trúc bậc một axit nucleic

2. Loại bỏ sự ô nhiễm của các phân tử khác (chẳng hạn như loại trừ sự can thiệp của RNA khi tách DNA)

3. Không có dung môi hữu cơ và nồng độ ion kim loại cao gây ức chế enzyme trong mẫu axit nucleic

4. Giảm thiểu các chất cao phân tử như protein, polysaccharides và lipid càng nhiều càng tốt

Phương pháp chiết xuất và tinh chế axit nucleic

1. Phương pháp chiết phenol/chloroform

Nó được phát minh vào năm 1956. Sau khi xử lý chất lỏng bị vỡ của tế bào hoặc chất đồng nhất của mô bằng phenol/chloroform, các thành phần axit nucleic, chủ yếu là DNA, được hòa tan trong pha nước, lipid chủ yếu ở pha hữu cơ và protein nằm giữa hai pha. các giai đoạn.

2. Kết tủa rượu

Ethanol có thể loại bỏ lớp hydrat hóa của axit nucleic và làm lộ ra nhóm photphat tích điện âm, còn các ion tích điện dương như NA﹢ có thể kết hợp với nhóm photphat để tạo thành kết tủa.

3. Phương pháp sắc ký cột

Thông qua vật liệu hấp phụ dựa trên silica đặc biệt, DNA có thể được hấp phụ đặc biệt, trong khi RNA và protein có thể đi qua một cách trơn tru, sau đó sử dụng muối cao và độ pH thấp để liên kết axit nucleic và rửa giải bằng muối thấp và độ pH cao để tách và tinh chế hạt nhân. axit.

4. Phương pháp Cracking nhiệt bằng kiềm

Chiết xuất kiềm chủ yếu sử dụng sự khác biệt về cấu trúc liên kết giữa các plasmid tròn đóng cộng hóa trị và chất nhiễm sắc tuyến tính để tách chúng. Trong điều kiện kiềm, protein bị biến tính có thể hòa tan.

5. Phương pháp nhiệt phân sôi

Dung dịch DNA được xử lý nhiệt để tận dụng các đặc tính của phân tử DNA tuyến tính để tách các đoạn DNA khỏi kết tủa được hình thành bởi protein biến tính và mảnh vụn tế bào bằng cách ly tâm.

6. Phương pháp hạt nano từ tính

Sử dụng công nghệ nano để cải thiện và biến đổi bề mặt của hạt nano siêu thuận từ, hạt nano oxit silic siêu thuận từ đã được chế tạo. Các hạt từ tính có thể nhận biết cụ thể và liên kết hiệu quả với các phân tử axit nucleic trên giao diện vi mô. Sử dụng đặc tính siêu thuận từ của các hạt nano silica, dưới tác dụng của muối Chaotropic (guanidine hydrochloride, guanidine isothiocyanate, v.v.) và từ trường bên ngoài, DNA và RNA được phân lập từ máu, mô động vật, thực phẩm, vi sinh vật gây bệnh và các mẫu khác.