Tozalash usuli qandayoqsillarni tozalash tizimi? Tozalangan oqsilning kodlash DNK ketma-ketligini bilish, maqsadli genda qaysi hujayralar yoki to'qimalarning haddan tashqari ifodalanganligini ko'rish va maqsadli DNK fragmentining arfini kuchaytirish uchun gen primerlarini loyihalash kerak. Bu maqsadli gen bo'laklarini olish deb ataladigan narsa.

Ekspressiya vektorini qurish: Olingan gen ifodasining o'ziga xos xususiyatlariga ega prokaryotik yoki eukaryotik ekspresyon vektorida ushbu bosqichning asosiy muammosi plazmid va qiziqish genini va ekspressiya tizimini qurishdir. Prokaryotik ifoda vaqti qisqa, xarajati past va katta miqdordagi ifoda ustuvor hisoblanadi; gen E. coli da ifodalanmaydi va muammo kodonni optimallashtirishda yuzaga keladi. Proteinning yaxshi faolligi va tozalanishini hisobga olgan holda, tadqiqotchilar Pichi xamirturushida ifodalashni tanladilar. Kodonni optimallashtirishning muvaffaqiyatli ifodasi muhim ahamiyatga ega.

Proteinni tozalash tizimini tozalash usuli qanday:

1. Yog'ingarchilik.

2. Elektroforez: Zaryadlangan oqsil o'zining izoelektrik nuqtasidan yuqori yoki pastroq bo'lib, elektr maydonidagi elektr maydonining salbiy elektrodiga yoki musbat elektrodiga o'tkazilishi mumkin. Qo'llab-quvvatlash plyonka elektroforez, elektroforez va boshqalar.

3. Dializ: Katta molekulalarni oqsillar va kichik molekulyar organik birikmalardan ajratish uchun ikkita dializ sumkasidan foydalanadigan usul.

4. Xromatografiya: Ion almashinuvi xromatografiyasi oqsillarning erkin xossalaridan foydalanadi. Muayyan pH ostida oqsillarning zaryadlari va xossalari har xil bo'lib, ularni ion almashinuvi xromatografiyasi yordamida ajratish mumkin. Anion almashinish xromatografiyasida birinchi navbatda past manfiy quvvatga ega bo'lgan oqsillar elutsiya qilinadi. Jel filtrlash deb ham ataladigan molekulyar elaklar. Kichik oqsillar teshiklarga kiradi va ularda uzoq vaqt qoladi. Katta oqsillar teshiklarga kira olmaydi va to'g'ridan-to'g'ri oqadi.

5. Tozalash usuli nimadan iboratoqsillarni tozalash tizimi? Ultratsentrifugalash: Proteinni tozalash molekulyar og'irlikni aniqlash uchun ishlatilishi mumkin va oqsil sifatida ishlatilishi mumkin. Turli xil zichlikdagi oqsillarning hosil bo'lishi ajratiladi.