Nuklein kislota deoksiribonuklein kislotasi (DNK) va ribonuklein kislotasi (RNK) ga bo'linadi, ular orasida RNK turli funktsiyalarga ko'ra ribosoma RNK (rRNK), xabarchi RNK (mRNK) va transfer RNK (tRNK) ga bo'linishi mumkin.

DNK asosan yadro, mitoxondriya va xloroplastlarda, RNK esa sitoplazmada tarqalgan.

Purin asoslari va pirimidin asoslari nuklein kislotalarda konjugatsiyalangan qo'sh bog'larga ega bo'lganligi sababli, nuklein kislotalar ultrabinafsha nurlarini yutish xususiyatlariga ega. DNK natriy tuzlarining ultrabinafsha nurlanishi 260 nm atrofida bo'lib, uning absorbsiyasi A260 sifatida ifodalanadi va u 230 nm yutilish chuqurligida bo'ladi, shuning uchun ultrabinafsha spektroskopiyadan foydalanish mumkin. Nuklein kislotalar miqdoriy va sifat jihatidan luminometr yordamida aniqlanadi.

Nuklein kislotalar amfolitlar bo'lib, ular polikislotalarga teng. Nuklein kislotalarni neytral yoki ishqoriy tamponlar yordamida anionlarga ajratish va anod tomon harakatlanish uchun elektr maydoniga joylashtirish mumkin. Bu elektroforez printsipi.

Nuklein kislotalarni olish va tozalash tamoyillari va talablari

1. Nuklein kislotaning birlamchi tuzilishining yaxlitligini ta'minlash

2. Boshqa molekulalarning ifloslanishini yo'q qilish (masalan, DNKni olishda RNK aralashuvini istisno qilish)

3. Nuklein kislota namunalarida fermentlarni inhibe qiluvchi organik erituvchilar va yuqori konsentratsiyali metall ionlari bo'lmasligi kerak.

4. Proteinlar, polisaxaridlar va lipidlar kabi makromolekulyar moddalarni iloji boricha kamaytiring.

Nuklein kislotani olish va tozalash usuli

1. Fenol/xloroformni ajratib olish usuli

U 1956 yilda ixtiro qilingan. Hujayraning singan suyuqligi yoki toʻqima gomogenati fenol/xloroform bilan ishlov berilgandan soʻng nuklein kislota komponentlari, asosan, DNK suvli fazada, lipidlar asosan organik fazada, oqsillar esa ikkalasi oʻrtasida joylashgan. bosqichlari.

2. Spirtli ichimliklarning cho'kishi

Etanol nuklein kislotaning hidratsiya qatlamini yo'q qilishi va manfiy zaryadlangan fosfat guruhini ochishi mumkin va NA﹢ kabi musbat zaryadlangan ionlar fosfat guruhi bilan birlashib cho'kma hosil qilishi mumkin.

3. Xromatografik ustun usuli

Maxsus silika asosidagi adsorbsion material orqali DNK maxsus adsorbsiyalanishi mumkin, RNK va oqsil esa silliq o'tishi mumkin, so'ngra nuklein kislotani bog'lash uchun yuqori tuz va past pH dan foydalaning va nukleinni ajratish va tozalash uchun past tuz va yuqori pH bilan elute qilinadi. kislota.

4. Termik kreking ishqoriy usuli

Ishqoriy ekstraksiya asosan kovalent yopiq dumaloq plazmidlar va chiziqli xromatin o'rtasidagi topologik farqlarni ularni ajratish uchun ishlatadi. Ishqoriy sharoitda denatüratsiyalangan oqsillar eriydi.

5. Qaynatish piroliz usuli

DNK eritmasi DNK bo'laklarini denatüratsiyalangan oqsillar va hujayra qoldiqlari tomonidan hosil bo'lgan cho'kmadan ajratish uchun chiziqli DNK molekulalarining xususiyatlaridan foydalanish uchun issiqlik bilan ishlov beriladi.

6. Nanomagnit boncuklar usuli

Nanotexnologiya yordamida superparamagnit nanozarrachalar yuzasini yaxshilash va o'zgartirish uchun superparamagnit kremniy oksidi nano-magnit boncuklar tayyorlanadi. Magnit boncuklar mikroskopik interfeysda nuklein kislota molekulalarini aniq taniydi va samarali tarzda bog'laydi. Silika nanosferalarining superparamagnit xususiyatlaridan foydalangan holda, xaotrop tuzlar (guanidin gidroxlorid, guanidin izotiosiyanat va boshqalar) va tashqi magnit maydon ta'sirida DNK va RNK qon, hayvon to'qimalari, oziq-ovqat, patogen mikroorganizmlar va boshqa namunalardan ajratildi.