Proteinlarni ajratish va tozalash biokimyoviy tadqiqotlar va qo'llashda keng qo'llaniladi va muhim operatsion mahoratdir. Oddiy eukaryotik hujayra minglab turli xil oqsillarni o'z ichiga olishi mumkin, ba'zilari juda boy, ba'zilari esa faqat bir nechta nusxalarni o'z ichiga oladi. Muayyan narsani o'rganish uchunoqsil, birinchi navbatda oqsilni boshqa oqsillar va oqsil bo'lmagan molekulalardan tozalash kerak.

1. Tuzlash usulioqsil:

Neytral tuz oqsilning eruvchanligiga sezilarli ta'sir ko'rsatadi. Odatda, past tuz konsentratsiyasida tuz konsentratsiyasining oshishi bilan oqsilning eruvchanligi ortadi. Bu tuzlash deb ataladi; tuz konsentratsiyasi ortib borishda davom etganda, oqsilning eruvchanligi turli darajada kamayadi va birin-ketin ajralib chiqadi. Bu hodisa tuzlanish deb ataladi.

2. Izoelektrik nuqtalarni stacking usuli:

Protein statik bo'lganda zarrachalar orasidagi elektrostatik repulsiya eng kichik bo'ladi, shuning uchun eruvchanlik ham eng kichikdir. Turli oqsillarning izoelektrik nuqtalari har xil. Konditsioner eritmaning pH qiymati oqsilning izoelektrik nuqtasiga erishish uchun ishlatilishi mumkin, uni to'plang, lekin bu usul kamdan-kam hollarda yolg'iz qo'llaniladi va uni tuzlash usuli bilan birlashtirish mumkin.

3.Dializ va ultrafiltratsiya:

Dializ turli molekulyar o'lchamdagi oqsillarni ajratish uchun yarim o'tkazuvchan membranadan foydalanadi. Ultrafiltratsiya usuli suv va boshqa kichik erigan molekulalarni yarim o'tkazuvchan membranadan o'tkazish uchun yuqori bosim yoki markazdan qochma kuchdan foydalanadi.oqsilmembranada qoladi. Turli molekulyar og'irlikdagi oqsillarni ushlab turish uchun turli xil g'ovak o'lchamlarini tanlashingiz mumkin.

4.Gel filtrlash usuli:

O'lchamni istisno qilish xromatografiyasi yoki molekulyar elak xromatografiyasi deb ham ataladi, bu protein aralashmalarini molekulyar o'lchamiga ko'ra ajratishning eng foydali usullaridan biridir. Ustun ichida ko'proq ishlatiladigan qadoqlash materiallari glyukoza jeli (Sephadex ged) va agaroz jeli (agaroz jeli).

5. Elektroforez:

Xuddi shu pH sharoitida turli xil molekulyar og'irliklar va elektr maydonidagi turli zaryadlar tufayli turli xil oqsillarni ajratish mumkin. Tashuvchi sifatida amfolitdan foydalanadigan izoelektrik to'plam elektroforeziga e'tibor qaratish lozim. Elektroforez paytida amfolit musbat elektroddan salbiy elektrodga asta-sekin qo'shiladigan pH gradientini hosil qiladi. Unda ma'lum bir zaryadga ega bo'lgan oqsil suzganda, u bir-biriga etib boradi. Elektr nuqtasining pH holati uzluksiz va bu usul turli xil oqsillarni tahlil qilish va tayyorlash uchun ishlatilishi mumkin.

6.Ion aloqasi xromatografiyasi:

ion aloqa vositalariga katyonik aloqa agentlari (masalan, karboksimetil tsellyuloza; CM-tsellyuloza) va anion aloqa agentlari (dietilaminoetil tsellyuloza) kiradi. Ion aloqasi xromatografiyasi ustunidan o'tayotganda, ion aloqa agentiga qarama-qarshi zaryadga ega bo'lgan oqsil ion aloqa agentiga, so'ngra adsorbsiyalanadi.oqsilpH yoki ion kuchini o'zgartirish orqali elutsiya qilinadi.

7.Yaqinlik xromatografiyasi:

Affinity xromatografiyasi oqsillarni ajratish uchun juda foydali usuldir. Ko'pincha ma'lum bir oqsilni yuqori tozalikdagi iflos oqsil aralashmasidan ajratish uchun faqat bir qadam kerak bo'ladi.

Bu usul ma'lum oqsillarni ligand (Ligand) deb ataladigan boshqa molekulaga kovalent emas, balki o'ziga xos bog'lanishiga asoslanadi.

Asosiy printsip:

oqsillar to'qimalar yoki hujayralardagi tartibsiz aralashmada mavjud va har bir hujayra turi minglab turli xil oqsillarni o'z ichiga oladi. Shuning uchun oqsillar orasidagi farq biokimyoning muhim qismidir va u yolg'iz emas. Yoki tayyor usullar to'plami har qanday turdagi oqsilni aralashgan oqsildan olib tashlashi mumkin, shuning uchun ko'pincha bir nechta usullar birgalikda qo'llaniladi.