Usullariproteinni tozalash:

Proteinni tozalash, oqsilni ajratish va tozalash usuli, oqsil erigan holatda asl hujayralar yoki to'qimalardan chiqariladi va biologik faollikni yo'qotmasdan asl tabiiy holatda qoladi. Shu sababli, material hayvon va yog 'to'qimasini olib tashlashi kerak, urug'lik materiali hatto taninlar kabi moddalardan urug' po'stlog'ining ifloslanishini tozalashi kerak va yog'li urug' tercihen past qaynaydigan organik erituvchidan foydalanishi kerak.

1. Proteinni tozalash usuli, hajmi va turli ajratish tahlil usullari: dializ va ultrafiltratsiya bu oqsillarni yarim o'tkazuvchan membranadan o'tolmaydigan molekulalarning tabiatidan o'tish uchun ishlatadi; zichlik gradienti santrifüjlash muhitdagi oqsilning sifati va zichligi zarrachalarga ko'proq ta'sir qiladi. O'rnatish tezligi tezroq; gel filtrlash ustunli xromatografiyaning bir turidir.

2. Foydalanishda eruvchanlik farqini ajratish: elektro-cho'kma, chunki oqsil molekulalarining aniq zaryadi nol izoelektrik nuqtada bo'lib, molekulalar orasidagi elektrostatik repulsiyani kamaytiradi, yig'ish oson va minimal eruvchanligi; tuz eritmasi bilan ishlatiladigan tuz eritmasi Konsentratsiya oqsilning eruvchanligini oshiradi yoki kamaytiradi.

3. Zaryad turli usullar bilan ajratiladi va tahlil qilinadi, asosiy tarkibga elektroforez va ion almashinuvi xromatografiyasi kiradi.

4. Usullariproteinni tozalashOqsillarning selektiv adsorbsiyasi va ajralishi zarrachalar adsorbsiyasi kuchidan foydalanadi.

5. Affinity xromatografiyasi ligandlarni ajratishga asoslangan. Ushbu biologik xususiyat oqsil molekulalarining ligand deb ataladigan boshqa molekulaga kovalent emas, balki maxsus bog'lanishiga imkon beradi.

6. Proteinni tozalash usuli: Past haroratli organik erituvchini cho'ktirish usuli: Ko'pchilik oqsillarning eruvchanligini va cho'kishini kamaytirish uchun metanol, etanol kabi suv bilan aralashadigan organik erituvchilardan foydalaning. Bu usul tuzlanishning o'lchamlaridan yuqori, ammo oqsil ko'proq denatürelanadi. Oson bo'lganda, uni past haroratda qilish kerak.

Qanday qilib tozalash kerakproteinni tozalash:

Proteinni qanday tozalash kerak, oqsil katta molekula va albuminning turli molekulyar o'lchamlari, oqsil va kichik molekula materiallarini, shuningdek, ajratilgan oqsil aralashmasini ajratishning bir necha oddiy usullari mavjud. Turli molekulyar o'lchamdagi oqsillarni ajratishning asosiy usullari dializ, ultrafiltratsiya, gel filtrlash va markazdan qochma bilan ajratishdir. Proteinni ajratish usullarida dializ va ultrafiltratsiya odatda qo'llaniladi. Ajraladigan dializ aralashmasi yarim o'tkazuvchan membranadan yasalgan dializ qopiga solinadi, so'ngra ajratish uchun dializ eritmasiga botiriladi. Ultrafiltratsiya - yarim o'tkazuvchan membranada markazdan qochma kuch yoki bosim yordamida suv va boshqa kichik molekulalarni o'tkazish va yarim o'tkazuvchan membranada oqsillarni ushlab turish jarayoni. Bu ikki usulni oqsilga asoslangan makromolekulalar va noorganik tuzga asoslangan kichik molekulalardan ajratish mumkin. Ular ko'pincha tuzlanadi, tuzni eritish usuli bilan birgalikda ishlatiladi yoki noorganik tuz eritmalari yordamida tuzlangandan keyin bu ikki usulni olish uchun kiritilishi mumkin.

1. Tuzlash usuli bilan oqsilni qanday tozalash kerak: Tuzlash usulining asosi shundaki, oqsilning suyultirilgan tuz eritmasida eruvchanligi tuz konsentratsiyasining oshishi bilan ortadi, ammo tuz konsentratsiyasi ma'lum bir qiymatga oshganda, suv faolligi ortadi. Kamaytirish, bu esa, o'z navbatida, molekulyar tuzilish yuzasi orqali ba'zi oqsillarni zaryadlarni hosil qilishiga olib kelishi mumkin, asta-sekin neytrallanadi va hidratsiya membranasi asta-sekin vayron bo'ladi, bu oxir-oqibat tegishli oqsillar va molekulalarning aglomeratsiyasini rivojlanishiga va turli xil eritmalardan cho'kishiga olib kelishi mumkin.

2. Organik erituvchini cho'ktirish usuli: Organik erituvchilarda oqsilning eruvchanligini kamaytirishning ikkita sababi bor: oqsilni suvsizlanish bilan tuz eritmasi sifatida qanday tozalash kerak; ikkinchidan, organik erituvchilarning suvga nisbatan dielektrik o'tkazuvchanligi qutbli erituvchilarda kamayishi mumkin.

3. Proteinni cho'ktiruvchi vosita: oqsil cho'ktiruvchi sifatida faqat oqsil cho'kmasining bir yoki bir turiga ta'sir qiladi, umumiy bo'lganlar ishqoriy, oqsil, lektin va og'ir metallardir.

4. Polietilen glikol cho'kmasi: suvda eriydigan ion bo'lmagan polimerlarni qanday tozalash kerakproteinni tozalash, masalan, polietilen glikol va natriy dekstran sulfat oqsillarni cho'ktirish uchun.