بائیو کیمسٹری ریسرچ اور ایپلی کیشن میں پروٹین کی علیحدگی اور صاف کرنا بڑے پیمانے پر استعمال ہوتا ہے اور یہ ایک اہم آپریشنل ہنر ہے۔ ایس سی جی پروٹین پیوریفیکیشن سسٹم کمپنی- سائپو انسٹرومنٹ نے خام علیحدگی اور باریک علیحدگی کے مواد کو مرتب کیا ہے۔پروٹینسب کے لیے پاکیزگی ایک عام یوکرائیوٹک سیل میں ہزاروں مختلف پروٹین ہوتے ہیں، کچھ بہت امیر ہوتے ہیں اور کچھ میں صرف چند کاپیاں ہوتی ہیں۔ کسی خاص پروٹین کا مطالعہ کرنے کے لیے ضروری ہے کہ پہلے پروٹین کو دوسرے پروٹین اور غیر پروٹین مالیکیولز سے پاک کیا جائے۔

موٹے علیحدگی

جب پروٹین کا عرق (بعض اوقات نیوکلک ایسڈز، پولی سیکرائڈز وغیرہ کے ساتھ ملایا جاتا ہے) حاصل کیا جاتا ہے، تو مطلوبہ کو الگ کرنے کے لیے مناسب طریقوں کا ایک سیٹ منتخب کیا جاتا ہے۔پروٹیندیگر نجاستوں سے عام طور پر، علیحدگی کا یہ مرحلہ نمکین آؤٹ، آئسو الیکٹرک پوائنٹ جمع اور نامیاتی سالوینٹ فریکشنیشن جیسے طریقے استعمال کرتا ہے۔ یہ طریقے سادگی اور پروسیسنگ کی بڑی صلاحیت کی خصوصیت رکھتے ہیں، جو بہت سی نجاستوں کو دور کر سکتے ہیں اور پروٹین کے محلول کو مرکوز کر سکتے ہیں۔ کچھ پروٹین کے عرق حجم میں بڑے ہوتے ہیں اور جمع یا نمکین نکال کر ارتکاز کے لیے موزوں نہیں ہوتے۔ آپ الٹرا فلٹریشن، جیل فلٹریشن، فریزنگ ویکیوم ڈرائینگ یا ارتکاز کے لیے دیگر طریقے منتخب کر سکتے ہیں۔

ٹھیک علیحدگی

نمونے کی کھردری تقسیم کے بعد، حجم عام طور پر چھوٹا ہوتا ہے، اور زیادہ تر نجاست کو ہٹا دیا گیا ہے۔ مزید تطہیر کے لیے، کرومیٹوگرافی کے طریقوں میں عام طور پر جیل فلٹریشن، آئن ایکسچینج کرومیٹوگرافی، جذب کرومیٹوگرافی، اور وابستگی کرومیٹوگرافی شامل ہیں۔ اگر ضروری ہو تو، آپ الیکٹروفورسس کا انتخاب بھی کر سکتے ہیں، بشمول زون الیکٹروفورسس، آئیسو الیکٹرک پوائنٹ سیٹ، وغیرہ کو صاف کرنے کے حتمی عمل کے طور پر۔ ذیلی تقسیم کی سطح سے علیحدگی کے لیے استعمال ہونے والا طریقہ عام طور پر منصوبہ بندی میں چھوٹا ہوتا ہے، لیکن اعلیٰ قرارداد کے ساتھ۔

کرسٹلائزیشن پروٹین کی علیحدگی اور صاف کرنے کا حتمی عمل ہے۔ اگرچہ کرسٹلائزیشن کا عمل اس بات کو یقینی نہیں بناتا ہے کہ پروٹین کا یکساں ہونا ضروری ہے، یہ صرف اس صورت میں ہوتا ہے جب ایک مخصوص پروٹین کو کرسٹل بنانے کے لیے محلول میں فائدہ ہو۔ کرسٹلائزیشن کا عمل خود ایک خاص حد تک پاکیزگی کے ساتھ ہوتا ہے، اور دوبارہ کرسٹالائزیشن تھوڑی مقدار میں ملاوٹ شدہ پروٹین کو ہٹا سکتی ہے۔ ڈینیچر ہونے کے بعد سےپروٹینکرسٹاللائزیشن کے عمل کے دوران کبھی نہیں پایا گیا، پروٹین کرسٹلائزیشن نہ صرف پاکیزگی کی علامت ہے، بلکہ اس بات کا تعین کرنے کے لئے ایک طاقتور رہنما خطوط بھی ہے کہ مصنوعات اپنی قدرتی حالت میں ہے۔