نیوکلک ایسڈ کو ڈی آکسیریبونیوکلک ایسڈ (DNA) اور رائبونیوکلک ایسڈ (RNA) میں تقسیم کیا گیا ہے، جن میں RNA کو مختلف افعال کے مطابق رائبوسومل RNA (rRNA)، میسنجر RNA (mRNA) اور ٹرانسفر RNA (tRNA) میں تقسیم کیا جا سکتا ہے۔

ڈی این اے بنیادی طور پر نیوکلئس، مائٹوکونڈریا اور کلوروپلاسٹ میں مرتکز ہوتا ہے، جبکہ آر این اے بنیادی طور پر سائٹوپلازم میں تقسیم ہوتا ہے۔

چونکہ purine کے اڈوں اور pyrimidine کے اڈوں نے نیوکلک ایسڈ میں دوہرے بانڈز کو جوڑ دیا ہے، اس لیے نیوکلک ایسڈ میں الٹرا وایلیٹ جذب کی خصوصیات ہوتی ہیں۔ ڈی این اے سوڈیم نمکیات کا الٹرا وائلٹ جذب تقریباً 260nm ہے، اور اس کے جذب کو A260 کے طور پر ظاہر کیا جاتا ہے، اور یہ 230nm پر جذب گرت پر ہے، اس لیے الٹرا وایلیٹ سپیکٹروسکوپی استعمال کی جا سکتی ہے۔ نیوکلک ایسڈ مقداری اور کوالٹی کے لحاظ سے ایک luminometer کے ذریعے طے کیے جاتے ہیں۔

نیوکلک ایسڈ ایمفولائٹس ہیں، جو پولی ایسڈز کے برابر ہیں۔ نیوٹرل یا الکلین بفرز کا استعمال کرتے ہوئے نیوکلک ایسڈز کو اینونز میں الگ کیا جا سکتا ہے، اور انوڈ کی طرف جانے کے لیے برقی میدان میں رکھا جا سکتا ہے۔ یہ الیکٹروفورسس کا اصول ہے۔

نیوکلک ایسڈ نکالنے اور صاف کرنے کے اصول اور تقاضے

1. نیوکلک ایسڈ کے بنیادی ڈھانچے کی سالمیت کو یقینی بنائیں

2. دوسرے مالیکیولز کی آلودگی کو ختم کریں (جیسے DNA نکالتے وقت RNA مداخلت کو چھوڑ کر)

3. کوئی نامیاتی سالوینٹس اور دھاتی آئنوں کی زیادہ تعداد نہیں ہونی چاہئے جو نیوکلک ایسڈ کے نمونوں میں خامروں کو روکتے ہیں۔

4. میکرو مالیکیولر مادوں جیسے پروٹین، پولی سیکرائڈز اور لپڈس کو جتنا ممکن ہو کم کریں۔

نیوکلک ایسڈ نکالنے اور صاف کرنے کا طریقہ

1. فینول/کلوروفارم نکالنے کا طریقہ

اس کی ایجاد 1956 میں ہوئی تھی۔ فینول/کلوروفارم کے ساتھ سیل ٹوٹے ہوئے مائع یا ٹشو ہوموجنیٹ کا علاج کرنے کے بعد، نیوکلک ایسڈ کے اجزاء، بنیادی طور پر ڈی این اے، پانی کے مرحلے میں تحلیل ہو جاتے ہیں، لپڈ بنیادی طور پر نامیاتی مرحلے میں ہوتے ہیں، اور پروٹین دونوں کے درمیان واقع ہوتے ہیں۔ مراحل

2. الکحل کی بارش

ایتھنول نیوکلک ایسڈ کی ہائیڈریشن پرت کو ختم کر سکتا ہے اور منفی چارج شدہ فاسفیٹ گروپ کو بے نقاب کر سکتا ہے، اور مثبت طور پر چارج شدہ آئن جیسے کہ NA﹢ فاسفیٹ گروپ کے ساتھ مل کر ایک پریزیٹیٹ بنا سکتے ہیں۔

3. کرومیٹوگرافک کالم کا طریقہ

خصوصی سلیکا پر مبنی جذب مواد کے ذریعے، ڈی این اے کو خاص طور پر جذب کیا جا سکتا ہے، جبکہ آر این اے اور پروٹین آسانی سے گزر سکتے ہیں، اور پھر نیوکلک ایسڈ کو باندھنے کے لیے زیادہ نمک اور کم پی ایچ کا استعمال کرتے ہیں، اور نیوکلک کو الگ کرنے اور صاف کرنے کے لیے کم نمک اور زیادہ پی ایچ کے ساتھ ایلوٹ کا استعمال کرتے ہیں۔ تیزاب

4. تھرمل کریکنگ الکلی طریقہ

الکلائن نکالنے میں بنیادی طور پر ہم آہنگی سے بند سرکلر پلازمیڈ اور لکیری کرومیٹن کے درمیان ٹاپولوجیکل فرق کو الگ کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ الکلائن حالات میں، منحرف پروٹین گھلنشیل ہوتے ہیں۔

5. ابلتے پائرولیسس کا طریقہ

ڈی این اے محلول کا گرمی سے علاج کیا جاتا ہے تاکہ لکیری ڈی این اے مالیکیولز کی خصوصیات سے فائدہ اٹھا کر ڈی این اے کے ٹکڑوں کو ڈینیچرڈ پروٹینز اور سیلولر ملبے سے سینٹرفیوگریشن کے ذریعے بننے والے پریزیٹیٹ سے الگ کیا جا سکے۔

6. نانو میگنیٹک موتیوں کا طریقہ

نینو ٹیکنالوجی کا استعمال کرتے ہوئے سپر پیرا میگنیٹک نینو پارٹیکلز کی سطح کو بہتر بنانے اور اس میں ترمیم کرنے کے لیے، سپر پیرا میگنیٹک سلکان آکسائیڈ نینو میگنیٹک موتیوں کو تیار کیا جاتا ہے۔ مقناطیسی موتیوں کو خاص طور پر ایک خوردبین انٹرفیس پر نیوکلک ایسڈ کے مالیکیولز کو پہچاننے اور مؤثر طریقے سے باندھ سکتے ہیں۔ سیلیکا نینو اسپیئرز کی سپرپرماگنیٹک خصوصیات کا استعمال کرتے ہوئے، Chaotropic نمکیات (guanidine hydrochloride، guanidine isothiocyanate، وغیرہ) اور ایک بیرونی مقناطیسی میدان کے تحت، DNA اور RNA کو خون، جانوروں کے بافتوں، خوراک، روگجنک مائکروجنزموں اور دیگر نمونوں سے الگ تھلگ کیا گیا۔