کے طریقےپروٹین صاف کرنا:

پروٹین کو صاف کرنے، الگ کرنے اور پروٹین کو صاف کرنے کا طریقہ، پروٹین اصل خلیوں یا بافتوں سے تحلیل شدہ حالت میں خارج ہوتا ہے اور حیاتیاتی سرگرمی کے نقصان کے بغیر اصل قدرتی حالت میں رہتا ہے۔ اس وجہ سے، مواد کو جانوروں اور ایڈیپوز ٹشوز کو ہٹا دینا چاہئے، بیج کے مواد کو ٹینن جیسے مادوں سے بیج کوٹ کی آلودگی کو بھی ختم کرنا چاہئے، اور تیل کے بیج کو ترجیحی طور پر کم ابلتے ہوئے نامیاتی سالوینٹ کا استعمال کرنا چاہئے۔

1. پروٹین صاف کرنے کا طریقہ، سائز اور مختلف علیحدگی کے تجزیہ کے طریقے: ڈائلیسس اور الٹرا فلٹریشن ان پروٹینوں کو مالیکیولز کی نوعیت سے گزرنے کے لیے استعمال کرتے ہیں جو نیم پارگمی جھلی سے نہیں گزر سکتے۔ کثافت گریڈینٹ سینٹرفیوگریشن میڈیم میں پروٹین کے معیار اور کثافت کا ذرات پر زیادہ اثر پڑے گا۔ طے کرنے کی رفتار تیز ہے؛ جیل فلٹریشن کالم کرومیٹوگرافی کی ایک قسم ہے۔

2. استعمال میں حل پذیری کے فرق کی علیحدگی: الیکٹرو-برسپٹیشن کیونکہ پروٹین کے مالیکیولز کا خالص چارج صفر آئسو الیکٹرک پوائنٹ پر ہوتا ہے، جو مالیکیولز کے درمیان الیکٹرو اسٹاٹک ریپولیشن کو کم کرتا ہے، جمع کرنے میں آسان، اور کم از کم حل پذیری؛ نمک کا محلول نمک کے محلول کے ساتھ استعمال کیا جاتا ہے ارتکاز پروٹین کی حل پذیری کو بڑھاتا ہے یا کم کرتا ہے۔

3. چارج کو مختلف طریقوں سے الگ اور تجزیہ کیا جاتا ہے، اہم مواد میں الیکٹروفورسس اور آئن ایکسچینج کرومیٹوگرافی شامل ہیں۔

4. کے طریقےپروٹین صاف کرناپروٹین کی منتخب جذب اور علیحدگی ذرہ جذب کی طاقت کو استعمال کرتی ہے۔

5. افینیٹی کرومیٹوگرافی لیگنڈس کی علیحدگی پر مبنی ہے۔ یہ حیاتیاتی خصوصیت پروٹین کے مالیکیولز کو کسی دوسرے مالیکیول سے ہم آہنگی کے بجائے خاص طور پر باندھنے کی اجازت دیتی ہے جسے ligand کہا جاتا ہے۔

6. پروٹین کو صاف کرنے کا طریقہ: کم درجہ حرارت والے نامیاتی سالوینٹس کی بارش کا طریقہ: زیادہ تر پروٹینوں کی حل پذیری اور ورن کو کم کرنے کے لیے ایسے نامیاتی سالوینٹس کا استعمال کریں جو پانی کے ساتھ مل سکتے ہیں، جیسے میتھانول، ایتھنول۔ یہ طریقہ ریزولیوشن سالٹنگ آؤٹ سے زیادہ ہے، لیکن پروٹین زیادہ ڈینیچر کرتا ہے جب آسان ہو تو اسے کم درجہ حرارت پر کیا جانا چاہیے۔

پاک کرنے کا طریقہپروٹین صاف کرنا:

پروٹین کو پاک کرنے کا طریقہ، پروٹین ایک بڑا مالیکیول ہے، اور البومن کے مختلف مالیکیولر سائز، پروٹین اور چھوٹے مالیکیول مواد کو الگ کرنے کے لیے کچھ آسان طریقے ہیں، اور پروٹین کا مرکب بھی الگ ہے۔ مختلف مالیکیولر سائز کے پروٹین کو الگ کرنے کے اہم طریقے ڈائلیسس، الٹرا فلٹریشن، جیل فلٹریشن، اور سینٹری فیوگل سیپریشن ہیں۔ ڈائیلاسز اور الٹرا فلٹریشن عام طور پر پروٹین علیحدگی کے طریقوں میں استعمال ہوتے ہیں۔ ڈائیلاسز مکسچر کو الگ کرنے کے لیے ایک ڈائیلاسز بیگ میں رکھا جاتا ہے جو نیم پارمیبل جھلی سے بنی ہوتی ہے، اور پھر علیحدگی کے لیے ڈائیلاسز سلوشن میں ڈبو دیا جاتا ہے۔ الٹرا فلٹریشن ایک نیم پارگمی جھلی میں سینٹرفیوگل فورس یا دباؤ کا استعمال کرتے ہوئے پانی اور دوسرے چھوٹے مالیکیولز کو منتقل کرنے اور نیم پارگمی جھلی میں پروٹین کو پھنسانے کا عمل ہے۔ ان دو طریقوں کو پروٹین پر مبنی میکرو مالیکیولز اور غیر نامیاتی نمک پر مبنی چھوٹے مالیکیولز سے الگ کیا جا سکتا ہے۔ انہیں اکثر نمکین کیا جاتا ہے، نمک کو تحلیل کرنے کے طریقہ کار کے ساتھ مل کر استعمال کیا جاتا ہے، یا غیر نامیاتی نمک کے محلول کا استعمال کرتے ہوئے نمکین نکالنے کے بعد ان دو طریقوں کو نکالنے کے لیے متعارف کرایا جا سکتا ہے۔

1. نمکین نکالنے کے طریقہ سے پروٹین کو کیسے صاف کیا جائے: نمکین نکالنے کے طریقہ کار کی بنیاد یہ ہے کہ نمک کے ارتکاز میں اضافے کے ساتھ پتلے نمک کے محلول میں پروٹین کی حل پذیری بڑھ جاتی ہے، لیکن جب نمک کی مقدار ایک خاص قدر تک بڑھ جاتی ہے، پانی کی سرگرمیوں میں اضافہ کیا جائے گا. کمی، جس کے نتیجے میں کچھ پروٹین مالیکیولر ڈھانچے کی سطح کے ذریعے چارجز پیدا کرنے کا سبب بن سکتے ہیں بتدریج بے اثر ہو جاتے ہیں، اور ہائیڈریشن جھلی بتدریج تباہ ہو جاتی ہے، جو بالآخر متعلقہ پروٹینوں اور مالیکیولز کو جمع کرنے اور مختلف محلولوں سے تیز ہونے کا سبب بن سکتی ہے۔

2. نامیاتی سالوینٹس کی بارش کا طریقہ: نامیاتی سالوینٹس میں پروٹین کی حل پذیری کو کم کرنے کی دو وجوہات ہیں: پانی کی کمی کے ساتھ نمک کے محلول کے طور پر پروٹین کو کیسے صاف کیا جائے؛ دوم، قطبی سالوینٹس میں پانی کے مقابلے میں نامیاتی سالوینٹس کے ڈائی الیکٹرک مستقل کو کم کیا جا سکتا ہے۔

3. پروٹین پرسیپیٹیٹنگ ایجنٹ: پروٹین ایک پریسیپیٹیٹنگ ایجنٹ کے طور پر صرف ایک قسم یا پروٹین کی ایک قسم پر کام کرتا ہے، عام الکلین، پروٹین، لیکٹین اور بھاری دھاتیں ہیں۔

4. Polyethylene glycol ورن: پانی میں گھلنشیل غیر آئنک پولیمر کو کیسے صاف کیا جائےپروٹین صاف کرنا، جیسے پولیتھیلین گلائکول اور سوڈیم ڈیکسٹران سلفیٹ پروٹین کو تیز کرنے کے لئے۔