Белгечләрне аеру һәм чистарту биохимия тикшеренүләрендә һәм кулланылышында киң кулланыла һәм мөһим оператив осталык булып тора. Типик эукариотик күзәнәк меңләгән төрле протеиннарны үз эченә ала, кайберләре бик бай, кайберләрендә берничә нөсхә генә бар. Билгеле өйрәнү өченпротеин, башта протеинны башка протеиннардан һәм протеин булмаган молекулалардан чистартырга кирәк.

1. Тозлау ысулыпротеин:

Нейтраль тоз протеинның эрүенә зур йогынты ясый. Гадәттә, аз тоз концентрациясе астында тоз концентрациясенең артуы белән, протеинның эрүчәнлеге арта. Бу тозлау дип атала; тоз концентрациясе артуын дәвам иткәндә, протеинның эрүчәнлеге төрле дәрәҗәләргә кадәр кими һәм бер-бер артлы аерыла. Бу күренеш тозлау дип атала.

2. Изоэлектрик ноктаны туплау ысулы:

Протеин статик булганда кисәкчәләр арасындагы электростатик репулиция иң кечкенә, шуңа күрә эретүчәнлеге дә иң кечкенә. Төрле протеиннарның изоэлектрик нокталары төрле. Кондиционер эремәсенең pH протеинның изоэлектрик ноктасына ирешү өчен кулланылырга мөмкин, аны туплагыз, ләкин бу ысул бик сирәк кулланыла һәм тозлау ысулы белән кушылырга мөмкин.

3. Диализ һәм ультрафильтрлау:

Диализ төрле молекуляр зурлыктагы протеиннарны аеру өчен ярым үткәргеч мембрананы куллана. Ультрафильтрлау ысулы су һәм башка кечкенә эре молекулаларны ярым үткәргеч мембрана аша үткәрү өчен югары басым яки центрифугааль көч куллана.протеинмембранада кала. Төрле молекуляр авырлыктагы протеиннарны тотып алу өчен сез төрле күзәнәк зурлыкларын сайлый аласыз.

4.Гел фильтрлау ысулы:

Шулай ук ​​зурлыкны чыгару хроматографиясе яки молекуляр чана хроматографиясе дип атала, бу протеин катнашмаларын молекуляр зурлыкка карап аеру өчен иң файдалы ысулларның берсе. Колоннада еш кулланыла торган төрү материаллары - глюкоза гели (Sephadex ged) һәм агароза гели (агароза гели).

5.Электрофорез:

Бер үк рН шартларында төрле протеиннар төрле молекуляр авырлыклары һәм электр кырындагы төрле корылмалар аркасында аерылырга мөмкин. Амфолитны йөртүче буларак кулланган изоэлектрик электрофорезга игътибар итәргә кирәк. Электрофорез вакытында амфолит pH градиентын формалаштыра, әкренләп уңай электродтан тискәре электродка кушыла. Билгеле корылма булган протеин анда йөзсә, ул бер-берсенә барып җитәчәк. Электр ноктасының рН позициясе өзлексез, һәм бу ысул төрле протеиннарны анализлау һәм әзерләү өчен кулланылырга мөмкин.

6.Ион элемтә хроматографиясе:

ион элемтә агентларына катион элемтә агентлары керә (мәсәлән, карбоксиметил целлюлоза; CM-целлюлоза) һәм анионик элемтә агентлары (диэтиламиноетил целлюлозасы). Ион элемтәсе хроматография баганасы аша үткәндә, ион элемтә агентына капма-каршы корылма булган протеин ион элемтә агентына, аннары adsorbedка урнаштырыла.протеинрН яки ион көчен үзгәртеп сузыла.

7.Аффинит хроматографиясе:

Якынлык хроматографиясе - протеиннарны аеру өчен бик файдалы ысул. Бу еш кына билгеле бер протеинны югары чисталык белән тәртипсез протеин катнашмасыннан чистарту өчен бер адым гына таләп итә.

Бу ысул кайбер белгечләрнең лиганд (Лиганд) дип аталган бүтән молекулага ковалент бәйләнешенә түгел, ә конкрет нигезенә нигезләнгән.

Төп принцип:

протеиннар тукымаларда яки күзәнәкләрдә буталчык катнашмада бар, һәм күзәнәкнең һәр төрендә меңләгән төрле протеиннар бар. Шуңа күрә, протеиннар арасындагы аерма биохимиянең мөһим өлеше, һәм ул берүзе дә булмаган. Яисә әзер ысуллар җыелмасы теләсә нинди протеинны тәртипсез катнаш протеиннан чыгарырга мөмкин, шуңа күрә берничә ысул еш кулланыла.