Nükleik asit, deoksiribonükleik asit (DNA) ve ribonükleik asit (RNA) olarak ikiye ayrılır; bunların arasında RNA, farklı işlevlere göre ribozomal RNA (rRNA), haberci RNA (mRNA) ve transfer RNA'ya (tRNA) bölünebilir.

DNA esas olarak çekirdekte, mitokondride ve kloroplastlarda yoğunlaşırken, RNA esas olarak sitoplazmada dağıtılır.

Pürin bazları ve pirimidin bazları, nükleik asitlerde konjuge çift bağlara sahip olduğundan, nükleik asitler ultraviyole emilim özelliklerine sahiptir. DNA sodyum tuzlarının ultraviyole absorpsiyonu 260 nm civarındadır ve absorbansı A260 olarak ifade edilir ve 230 nm'deki absorpsiyon çukurundadır, dolayısıyla ultraviyole spektroskopisi kullanılabilir. Nükleik asitler bir lüminometre ile niceliksel ve niteliksel olarak belirlenir.

Nükleik asitler, poliasitlere eşdeğer olan amfolitlerdir. Nükleik asitler, nötr veya alkalin tamponlar kullanılarak anyonlara ayrıştırılabilir ve anoda doğru hareket edecek şekilde bir elektrik alanına yerleştirilebilir. Bu elektroforezin prensibidir.

Nükleik asit ekstraksiyonu ve saflaştırma prensipleri ve gereksinimleri

1. Nükleik asit birincil yapısının bütünlüğünü sağlayın

2. Diğer moleküllerin kontaminasyonunu ortadan kaldırın (DNA ekstrakte edilirken RNA girişimini hariç tutmak gibi)

3. Nükleik asit numunelerinde enzimleri inhibe eden organik çözücüler ve yüksek konsantrasyonlarda metal iyonları bulunmamalıdır.

4. Proteinler, polisakkaritler ve lipitler gibi makromoleküler maddeleri mümkün olduğunca azaltın

Nükleik asit ekstraksiyonu ve saflaştırma yöntemi

1. Fenol/kloroform ekstraksiyon yöntemi

1956 yılında icat edilmiştir. Parçalanmış hücre sıvısı veya doku homojenatının fenol/kloroform ile işlenmesinden sonra, başta DNA olmak üzere nükleik asit bileşenleri sulu fazda çözülür, lipitler esas olarak organik fazdadır ve proteinler bu ikisi arasında yer alır. aşamalar.

2. Alkol çökelmesi

Etanol, nükleik asidin hidrasyon katmanını ortadan kaldırabilir ve negatif yüklü fosfat grubunu açığa çıkarabilir ve NA﹢ gibi pozitif yüklü iyonlar, bir çökelti oluşturmak üzere fosfat grubuyla birleşebilir.

3. Kromatografik sütun yöntemi

Özel silika bazlı adsorpsiyon malzemesi sayesinde, DNA spesifik olarak adsorbe edilebilirken, RNA ve protein sorunsuz bir şekilde geçebilir ve daha sonra nükleik asidi bağlamak için yüksek tuz ve düşük pH kullanabilir ve nükleik asidi ayırmak ve saflaştırmak için düşük tuz ve yüksek pH ile elüte edilebilir. asit.

4. Termal kırma alkali yöntemi

Alkali ekstraksiyonu esas olarak kovalent olarak kapalı dairesel plazmitler ve doğrusal kromatin arasındaki topolojik farklılıkları bunları ayırmak için kullanır. Alkali koşullar altında denatüre proteinler çözünür.

5. Kaynatma pirolizi yöntemi

DNA solüsyonu, DNA parçalarını denatüre proteinler ve hücresel artıkların oluşturduğu çökeltiden santrifüjleme yoluyla ayırmak için doğrusal DNA moleküllerinin özelliklerinden yararlanmak üzere ısıyla işleme tabi tutulur.

6. Nanomanyetik boncuk yöntemi

Süperparamanyetik nanopartiküllerin yüzeyini iyileştirmek ve değiştirmek için nanoteknoloji kullanılarak süperparamanyetik silikon oksit nano-manyetik boncuklar hazırlanır. Manyetik boncuklar, mikroskobik bir arayüzde nükleik asit moleküllerini spesifik olarak tanıyabilir ve bunlara etkili bir şekilde bağlanabilir. Silika nanosferlerinin süperparamanyetik özelliklerini kullanarak, Kaotropik tuzların (guanidin hidroklorür, guanidin izotiyosiyanat, vb.) ve harici bir manyetik alanın etkisi altında, kandan, hayvan dokusundan, gıdadan, patojenik mikroorganizmalardan ve diğer örneklerden DNA ve RNA izole edildi.