Proteinlerin ayrılması ve saflaştırılması, biyokimya araştırma ve uygulamalarında yaygın olarak kullanılmaktadır ve önemli bir operasyonel beceridir. Tipik bir ökaryotik hücre binlerce farklı protein içerebilir; bunların bazıları çok zengin, bazıları ise yalnızca birkaç kopya içerir. Belirli bir konuyu incelemek içinproteinProteini öncelikle diğer proteinlerden ve protein olmayan moleküllerden arındırmak gerekir.

1. Tuzlama yöntemiprotein:

Nötr tuzun proteinin çözünürlüğü üzerinde önemli bir etkisi vardır. Genellikle düşük tuz konsantrasyonu altında tuz konsantrasyonunun artmasıyla proteinin çözünürlüğü artar. Buna tuzlama denir; Tuz konsantrasyonu artmaya devam ettiğinde proteinin çözünürlüğü değişen derecelerde azalır ve birbiri ardına ayrışır. Bu olaya tuzlanma denir.

2. İzoelektrik nokta istifleme yöntemi:

Parçacıklar arasındaki elektrostatik itme, protein statik olduğunda en küçüktür, dolayısıyla çözünürlük de en küçüktür. Çeşitli proteinlerin izoelektrik noktaları farklıdır. Şartlandırma çözeltisinin pH'ı, bir proteinin izoelektrik noktasına ulaşmak ve birikmesini sağlamak için kullanılabilir, ancak bu yöntem nadiren tek başına kullanılır ve tuzlama yöntemiyle birleştirilebilir.

3.Diyaliz ve ultrafiltrasyon:

Diyaliz, farklı moleküler boyutlardaki proteinleri ayırmak için yarı geçirgen bir zar kullanır. Ultrafiltrasyon yöntemi, suyun ve diğer küçük çözünen moleküllerin yarı geçirgen bir zardan geçmesini sağlamak için yüksek basınç veya merkezkaç kuvveti kullanır.proteinmembran üzerinde kalır. Farklı molekül ağırlıklarına sahip proteinleri engellemek için farklı gözenek boyutları seçebilirsiniz.

4.Gel filtrasyon yöntemi:

Boyut dışlama kromatografisi veya moleküler elek kromatografisi olarak da adlandırılan bu, protein karışımlarını moleküler boyuta göre ayırmak için en kullanışlı yöntemlerden biridir. Kolonda en sık kullanılan paketleme malzemeleri glikoz jeli (Sephadex ged) ve agaroz jeldir (agaroz jeli).

5. Elektroforez:

Aynı pH koşulunda çeşitli proteinler, farklı moleküler ağırlıkları ve elektrik alanındaki farklı yükleri nedeniyle ayrılabilir. Taşıyıcı olarak amfoliti kullanan izoelektrik set elektroforezine dikkat etmeye değer. Elektroforez sırasında amfolit, pozitif elektrottan negatif elektrota kademeli olarak eklenen bir pH gradyanı oluşturur. Belli bir yüke sahip olan protein, içinde yüzdüğünde birbirine ulaşacaktır. Elektrik noktasının pH konumu süreksizdir ve bu yöntem çeşitli proteinleri analiz etmek ve hazırlamak için kullanılabilir.

6.İyon iletişim kromatografisi:

iyon iletişim ajanları arasında katyonik iletişim ajanları (karboksimetil selüloz; CM-selüloz gibi) ve anyonik iletişim ajanları (dietilaminoetil selüloz) yer alır. İyon iletişim kromatografisi kolonundan geçerken, iyon iletişim maddesinin zıt yüküne sahip protein, iyon iletişim maddesi üzerine adsorbe edilir ve daha sonra adsorbe edilir.proteinpH'ı veya iyonik kuvveti değiştirerek elute edilir.

7. Afinite kromatografisi:

Afinite kromatografisi proteinleri ayırmak için son derece kullanışlı bir yöntemdir. Belirli bir proteinin yüksek saflıkta dağınık bir protein karışımından saflaştırılması için genellikle yalnızca bir adım gerekir.

Bu yöntem, belirli proteinlerin ligand (Ligand) adı verilen başka bir moleküle kovalent olmaktan çok spesifik bağlanmasına dayanır.

Temel prensip:

proteinler dokularda veya hücrelerde dağınık bir karışım halinde bulunur ve her hücre tipi binlerce farklı protein içerir. Bu nedenle proteinler arasındaki ayrım biyokimyanın önemli bir parçasıdır ve yalnız değildir. Veya bir dizi hazır yöntem, dağınık bir karışık proteinden her türlü proteini çıkarabilir, bu nedenle genellikle birkaç yöntem bir arada kullanılır.