Ano ang paraan ng paglilinis ngsistema ng paglilinis ng protina? Kinakailangang malaman ang coding DNA sequence ng purified protein, para makita kung aling mga cell o tissue ang overexpressed sa target na gene, at magdisenyo ng mga gene primer upang palakihin ang arf ng target na DNA fragment. Ito ang tinatawag na pagkuha ng mga target na fragment ng gene.

Konstruksyon ng expression vector: Sa prokaryotic o eukaryotic expression vector na may mga katangian ng nakuha na expression ng gene mismo, ang pangunahing problema ng hakbang na ito ay ang pagbuo ng plasmid at ang gene ng interes, at ang expression system. Ang prokaryotic expression time ay maikli, ang gastos ay mababa, at isang malaking halaga ng expression ay isang priority; ang gene ay hindi ipinahayag sa E. coli, at ang problema ay nangyayari sa codon optimization. Sa pagsasaalang-alang ng mas mahusay na aktibidad at paglilinis ng protina, pinili ng mga mananaliksik na ipahayag sa Pichi yeast. Ang matagumpay na pagpapahayag ng pag-optimize ng codon ay mahalaga.

Ano ang paraan ng paglilinis ng sistema ng paglilinis ng protina:

1. Pag-ulan.

2. Electrophoresis: Ang isang naka-charge na protina ay mas mataas o mas mababa kaysa sa isoelectric point nito at maaaring ilipat sa negatibong electrode o sa positibong electrode ng electric field sa electric field. Suportahan ang film electrophoresis, electrophoresis, atbp.

3. Dialysis: Isang paraan na gumagamit ng dalawang dialysis bag upang paghiwalayin ang malalaking molecule mula sa mga protina at maliliit na molekular na organic compound.

4. Chromatography: Ang chromatography ng pagpapalitan ng Ion ay gumagamit ng mga libreng katangian ng mga protina. Sa ilalim ng isang tiyak na pH, ang mga singil at katangian ng mga protina ay iba, at maaari silang paghiwalayin sa pamamagitan ng chromatography ng pagpapalitan ng ion. Sa anion exchange chromatography, ang mga protina na may mababang negatibong kapangyarihan ay unang na-eluted. Molecular sieves, na kilala rin bilang gel filtration. Ang mga maliliit na protina ay pumapasok sa mga pores at nananatili sa kanila nang mahabang panahon. Ang malalaking protina ay hindi makapasok sa mga pores at direktang umaagos palabas.

5. Ano ang paraan ng paglilinis ngsistema ng paglilinis ng protina? Ultracentrifugation: Maaaring gamitin ang purification ng protina upang matukoy ang bigat ng molekular at maaaring gamitin bilang protina. Ang pagbuo ng mga protina na may iba't ibang densidad ay pinaghihiwalay.