Ang paghihiwalay at paglilinis ng mga protina ay malawakang ginagamit sa biochemistry na pananaliksik at aplikasyon at ito ay isang mahalagang kasanayan sa pagpapatakbo. Ang isang tipikal na eukaryotic cell ay maaaring maglaman ng libu-libong iba't ibang mga protina, ang ilan ay napakayaman at ang ilan ay naglalaman lamang ng ilang mga kopya. Upang pag-aralan ang isang tiyakprotina, kinakailangan munang linisin ang protina mula sa iba pang mga protina at mga molekulang hindi protina.

1. Salting-out na paraan ngprotina:

Ang neutral na asin ay may malaking epekto sa solubility ng protina. Sa pangkalahatan, sa pagtaas ng konsentrasyon ng asin sa ilalim ng mababang konsentrasyon ng asin, ang solubility ng protina ay tumataas. Ito ay tinatawag na pag-aasin; kapag ang konsentrasyon ng asin ay patuloy na tumataas, Ang solubility ng protina ay bumababa sa iba't ibang antas at naghihiwalay ng isa-isa. Ang kababalaghang ito ay tinatawag na salting out.

2. Isoelectric point stacking method:

Ang electrostatic repulsion sa pagitan ng mga particle ay ang pinakamaliit kapag ang protina ay static, kaya ang solubility din ang pinakamaliit. Ang mga isoelectric na punto ng iba't ibang mga protina ay iba. Ang pH ng conditioning solution ay maaaring gamitin upang maabot ang isoelectric point ng isang protina.

3. Dialysis at ultrafiltration:

Gumagamit ang dialysis ng semi-permeable membrane upang paghiwalayin ang mga protina na may iba't ibang laki ng molekular. Ang ultrafiltration method ay gumagamit ng mataas na presyon o centrifugal force upang gawin ang tubig at iba pang maliliit na solute molecule na dumaan sa isang semi-permeable membrane, habang angprotinanananatili sa lamad. Maaari kang pumili ng iba't ibang laki ng butas upang mahadlangan ang mga protina ng iba't ibang timbang ng molekular.

4.Gel na paraan ng pagsasala:

Tinatawag din na size exclusion chromatography o molecular sieve chromatography, ito ay isa sa mga pinakakapaki-pakinabang na pamamaraan para sa paghihiwalay ng mga pinaghalong protina ayon sa laki ng molekular. Ang mas karaniwang ginagamit na packing materials sa column ay glucose gel (Sephadex ged) at agarose gel (agarose gel).

5. Electrophoresis:

Sa ilalim ng parehong kondisyon ng pH, ang iba't ibang mga protina ay maaaring paghiwalayin dahil sa kanilang iba't ibang mga molekular na timbang at iba't ibang mga singil sa electric field. Ito ay nagkakahalaga ng pagbibigay pansin sa isoelectric set electrophoresis, na gumagamit ng ampholyte bilang isang carrier. Sa panahon ng electrophoresis, ang ampholyte ay bumubuo ng isang pH gradient na unti-unting idinagdag mula sa positibong elektrod patungo sa negatibong elektrod. Kapag ang protina na may isang tiyak na singil ay lumalangoy dito, ito ay makakarating sa isa't isa. Ang pH na posisyon ng electrical point ay hindi nagpapatuloy, at ang pamamaraang ito ay maaaring gamitin upang pag-aralan at maghanda ng iba't ibang mga protina.

6. Ion communication chromatography:

Kabilang sa mga ahente ng komunikasyong ion ang mga ahente ng komunikasyong cationic (tulad ng carboxymethyl cellulose; CM-cellulose) at mga ahente ng komunikasyong anionic (diethylaminoethyl cellulose). Kapag dumadaan sa column ng chromatography ng komunikasyon ng ion, ang protina na may kabaligtaran na singil sa ahente ng komunikasyon ng ion ay na-adsorbed sa ahente ng komunikasyon ng ion, at pagkatapos ay ang adsorbedprotinaay eluted sa pamamagitan ng pagbabago ng pH o ionic na lakas.

7. Affinity chromatography:

Ang affinity chromatography ay isang lubhang kapaki-pakinabang na paraan para sa paghihiwalay ng mga protina. Kadalasan ay nangangailangan lamang ng isang hakbang upang paghiwalayin ang isang partikular na protina upang ma-purify mula sa isang magulo na pinaghalong protina na may mataas na kadalisayan.

Ang pamamaraang ito ay batay sa tiyak sa halip na covalent na pagbubuklod ng ilang mga protina sa isa pang molekula na tinatawag na ligand (Ligand).

Ang pangunahing prinsipyo:

ang mga protina ay umiiral sa isang magulo na halo sa mga tisyu o mga cell, at ang bawat uri ng cell ay naglalaman ng libu-libong iba't ibang mga protina. Samakatuwid, ang pagkakaiba sa pagitan ng mga protina ay isang mahalagang bahagi ng biochemistry, at hindi ito nag-iisa. O kaya ay maaaring alisin ng isang hanay ng mga handa na pamamaraan ang anumang uri ng protina mula sa isang magulo na halo-halong protina, kaya maraming mga pamamaraan ang kadalasang ginagamit sa kumbinasyon.