วิธีการทำให้บริสุทธิ์ของระบบการทำให้โปรตีนบริสุทธิ์- จำเป็นต้องทราบลำดับการเข้ารหัส DNA ของโปรตีนบริสุทธิ์ เพื่อดูว่าเซลล์หรือเนื้อเยื่อใดมีการแสดงออกมากเกินไปในยีนเป้าหมาย และเพื่อออกแบบไพรเมอร์ของยีนเพื่อขยายส่วนโค้งของชิ้นส่วน DNA เป้าหมาย นี่คือสิ่งที่เรียกว่าการได้มาซึ่งชิ้นส่วนของยีนเป้าหมาย

การสร้างเวกเตอร์นิพจน์: ในเวกเตอร์นิพจน์โปรคาริโอตหรือยูคาริโอตที่มีคุณลักษณะของการแสดงออกของยีนที่ได้รับนั้น ปัญหาหลักของขั้นตอนนี้คือการสร้างพลาสมิดและยีนที่สนใจ และระบบการแสดงออก เวลาการแสดงออกของโปรคาริโอตนั้นสั้น ค่าใช้จ่ายต่ำ และการแสดงออกจำนวนมากถือเป็นเรื่องสำคัญ ยีนไม่แสดงออกใน E. coli และปัญหาเกิดขึ้นในการปรับรหัสให้เหมาะสม เมื่อพิจารณาถึงกิจกรรมที่ดีขึ้นและการทำให้โปรตีนบริสุทธิ์ นักวิจัยเลือกที่จะแสดงออกในยีสต์ Pichi การแสดงออกถึงความสำเร็จของการเพิ่มประสิทธิภาพโค้ดเป็นสิ่งสำคัญ

วิธีการทำให้บริสุทธิ์ของระบบการทำให้บริสุทธิ์โปรตีนคืออะไร:

1. การตกตะกอน

2. อิเล็กโทรโฟรีซิส: โปรตีนที่มีประจุจะสูงหรือต่ำกว่าจุดไอโซอิเล็กทริกและสามารถเคลื่อนย้ายไปยังอิเล็กโทรดลบหรืออิเล็กโทรดบวกของสนามไฟฟ้าในสนามไฟฟ้าได้ รองรับฟิล์มอิเล็กโตรโฟเรซิส, อิเล็กโทรโฟรีซิส ฯลฯ

3. การฟอกไต: วิธีการที่ใช้ถุงฟอกไตสองถุงเพื่อแยกโมเลกุลขนาดใหญ่ออกจากโปรตีนและสารประกอบอินทรีย์โมเลกุลขนาดเล็ก

4. โครมาโตกราฟี: โครมาโตกราฟีแบบแลกเปลี่ยนไอออนใช้คุณสมบัติอิสระของโปรตีน ภายใต้ค่า pH ที่กำหนด ประจุและคุณสมบัติของโปรตีนจะแตกต่างกัน และสามารถแยกออกได้ด้วยโครมาโตกราฟีแบบแลกเปลี่ยนไอออน ในโครมาโทกราฟีแบบแลกเปลี่ยนประจุลบ โปรตีนที่มีพลังงานลบต่ำจะถูกชะล้างก่อน ตะแกรงโมเลกุลหรือที่เรียกว่าการกรองแบบเจล โปรตีนขนาดเล็กเข้าสู่รูขุมขนและคงอยู่ในรูขุมขนเป็นเวลานาน โปรตีนขนาดใหญ่ไม่สามารถเข้าไปในรูขุมขนและไหลออกได้โดยตรง

5.วิธีการทำให้บริสุทธิ์ของระบบการทำให้โปรตีนบริสุทธิ์- การหมุนเหวี่ยงแบบพิเศษ: การทำให้โปรตีนบริสุทธิ์สามารถใช้เพื่อกำหนดน้ำหนักโมเลกุลและสามารถใช้เป็นโปรตีนได้ การก่อตัวของโปรตีนที่มีความหนาแน่นต่างกันจะถูกแยกออกจากกัน