การแยกและการทำให้โปรตีนบริสุทธิ์ถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในการวิจัยและการประยุกต์ทางชีวเคมี และเป็นทักษะการปฏิบัติงานที่สำคัญ บริษัท SCG Protein Purification System - Saipu Instrument ได้รวบรวมเนื้อหาการแยกน้ำมันดิบและการแยกละเอียดของโปรตีนการทำให้บริสุทธิ์สำหรับทุกคน เซลล์ยูคาริโอตทั่วไปสามารถประกอบด้วยโปรตีนต่างๆ นับพันชนิด บางชนิดมีความเข้มข้นมากและบางชนิดมีเพียงไม่กี่สำเนาเท่านั้น เพื่อศึกษาโปรตีนบางชนิด จำเป็นต้องทำให้โปรตีนบริสุทธิ์จากโปรตีนอื่นและโมเลกุลที่ไม่ใช่โปรตีนก่อน

การแยกหยาบ

เมื่อได้รับสารสกัดโปรตีน (บางครั้งผสมกับกรดนิวคลีอิก โพลีแซ็กคาไรด์ ฯลฯ) จะมีการเลือกชุดวิธีการที่เหมาะสมเพื่อแยกโปรตีนที่ต้องการโปรตีนจากสิ่งสกปรกอื่นๆ โดยทั่วไป ขั้นตอนการแยกนี้จะใช้วิธีการต่างๆ เช่น การแยกเกลือ การสะสมจุดไอโซอิเล็กทริก และการแยกส่วนของตัวทำละลายอินทรีย์ วิธีการเหล่านี้มีลักษณะพิเศษคือความเรียบง่ายและความสามารถในการแปรรูปขนาดใหญ่ ซึ่งสามารถขจัดสิ่งเจือปนจำนวนมากและทำให้สารละลายโปรตีนมีความเข้มข้น สารสกัดโปรตีนบางชนิดมีปริมาณมากและไม่เหมาะกับการทำให้เข้มข้นโดยการสะสมหรือทำให้เกลือออก คุณสามารถเลือกการกรองแบบอัลตราฟิลเตรชัน การกรองแบบเจล การทำแห้งแบบสุญญากาศแบบแช่แข็ง หรือวิธีการอื่นๆ เพื่อเพิ่มความเข้มข้น

แยกละเอียด

หลังจากแยกตัวอย่างคร่าวๆ แล้ว โดยทั่วไปปริมาตรจะมีน้อย และสิ่งสกปรกส่วนใหญ่จะถูกกำจัดออกไปแล้ว สำหรับการทำให้บริสุทธิ์เพิ่มเติม วิธีการโครมาโทกราฟีโดยทั่วไปรวมถึงการกรองด้วยเจล โครมาโตกราฟีแบบแลกเปลี่ยนไอออน โครมาโตกราฟีแบบดูดซับ และโครมาโตกราฟีแบบอัฟฟินิตี หากจำเป็น คุณสามารถเลือกอิเล็กโตรโฟรีซิส รวมถึงโซนอิเล็กโตรโฟเรซิส ชุดจุดไอโซอิเล็กทริก ฯลฯ เป็นกระบวนการทำให้บริสุทธิ์ขั้นสุดท้ายได้ วิธีการที่ใช้ในการแยกระดับเขตการปกครองโดยทั่วไปมีขนาดเล็กในการวางแผน แต่มีความละเอียดสูง

การตกผลึกเป็นกระบวนการสุดท้ายของการแยกโปรตีนและการทำให้บริสุทธิ์ แม้ว่ากระบวนการตกผลึกไม่ได้รับประกันว่าโปรตีนจะต้องสม่ำเสมอ แต่จะเกิดขึ้นก็ต่อเมื่อโปรตีนบางชนิดมีข้อได้เปรียบในสารละลายเพื่อสร้างผลึกเท่านั้น กระบวนการตกผลึกนั้นมาพร้อมกับการทำให้บริสุทธิ์ในระดับหนึ่ง และการตกผลึกซ้ำสามารถกำจัดโปรตีนที่เจือปนจำนวนเล็กน้อยออกไปได้ ตั้งแต่ถูกแปลงสภาพโปรตีนไม่เคยพบในระหว่างกระบวนการตกผลึก การตกผลึกของโปรตีนไม่เพียงแต่เป็นสัญญาณของความบริสุทธิ์เท่านั้น แต่ยังเป็นแนวทางที่มีประสิทธิภาพในการพิจารณาว่าผลิตภัณฑ์อยู่ในสภาพธรรมชาติอีกด้วย