วิธีการของการทำโปรตีนให้บริสุทธิ์:

วิธีการทำให้โปรตีนบริสุทธิ์ การแยก และการทำให้โปรตีนบริสุทธิ์ โปรตีนจะถูกปล่อยออกจากเซลล์หรือเนื้อเยื่อดั้งเดิมในสถานะละลายและคงอยู่ในสถานะธรรมชาติดั้งเดิมโดยไม่สูญเสียกิจกรรมทางชีวภาพ ด้วยเหตุนี้ วัสดุควรกำจัดสัตว์และเนื้อเยื่อไขมัน วัสดุเมล็ดพืชควรลอกการปนเปื้อนของเปลือกเมล็ดออกจากสารต่างๆ เช่น แทนนิน และเมล็ดน้ำมันควรใช้ตัวทำละลายอินทรีย์ที่มีจุดเดือดต่ำ

1. วิธีการทำให้โปรตีนบริสุทธิ์ ขนาด และวิธีการวิเคราะห์การแยกที่แตกต่างกัน: การฟอกไตและการกรองแบบอัลตราฟิลเตรชันใช้โปรตีนเหล่านี้เพื่อผ่านลักษณะของโมเลกุลที่ไม่สามารถผ่านเมมเบรนกึ่งซึมผ่านได้ การปั่นเหวี่ยงไล่ระดับความหนาแน่น คุณภาพและความหนาแน่นของโปรตีนในตัวกลางจะมีผลกระทบต่ออนุภาคมากขึ้น ความเร็วในการปักหลักเร็วขึ้น การกรองแบบเจลเป็นประเภทของคอลัมน์โครมาโทกราฟี

2. การแยกความแตกต่างของความสามารถในการละลายในการใช้งาน: การตกตะกอนด้วยไฟฟ้าเนื่องจากประจุสุทธิของโมเลกุลโปรตีนอยู่ที่จุดไอโซอิเล็กทริกเป็นศูนย์ ช่วยลดแรงผลักไฟฟ้าสถิตระหว่างโมเลกุล ง่ายต่อการรวมตัว และความสามารถในการละลายขั้นต่ำ สารละลายเกลือที่ใช้กับสารละลายเกลือ ความเข้มข้นจะเพิ่มหรือลดความสามารถในการละลายของโปรตีน

3. ประจุจะถูกแยกและวิเคราะห์ด้วยวิธีการต่างๆ เนื้อหาหลัก ได้แก่ อิเล็กโตรโฟรีซิสและโครมาโทกราฟีแบบแลกเปลี่ยนไอออน

4. วิธีการการทำโปรตีนให้บริสุทธิ์การดูดซับและการแยกโปรตีนแบบเลือกสรรใช้ความแรงของการดูดซับอนุภาค

5. Affinity chromatography ขึ้นอยู่กับการแยกลิแกนด์ ลักษณะทางชีววิทยานี้ช่วยให้โมเลกุลโปรตีนจับกันโดยเฉพาะแทนที่จะเป็นโควาเลนต์กับโมเลกุลอื่นที่เรียกว่าลิแกนด์

6. วิธีการทำให้โปรตีนบริสุทธิ์: วิธีการตกตะกอนของตัวทำละลายอินทรีย์ที่อุณหภูมิต่ำ: ใช้ตัวทำละลายอินทรีย์ที่ผสมกับน้ำได้ เช่น เมทานอล เอทานอล เพื่อลดความสามารถในการละลายและการตกตะกอนของโปรตีนส่วนใหญ่ วิธีนี้จะสูงกว่าความละเอียดในการเกลือออกแต่โปรตีนจะเสียสภาพมากกว่า เมื่อง่ายควรทำที่อุณหภูมิต่ำ

วิธีทำให้บริสุทธิ์การทำโปรตีนให้บริสุทธิ์:

วิธีทำให้โปรตีนบริสุทธิ์ โปรตีนเป็นโมเลกุลขนาดใหญ่ และอัลบูมินขนาดโมเลกุลต่างๆ มีวิธีที่ง่ายกว่าในการแยกโปรตีนและวัสดุโมเลกุลขนาดเล็ก และยังแยกส่วนผสมของโปรตีนด้วย วิธีการหลักในการแยกโปรตีนที่มีขนาดโมเลกุลต่างกันคือการล้างไต การกรองแบบอัลตราฟิลเตรชัน การกรองแบบเจล และการแยกแบบแรงเหวี่ยง การฟอกไตและการกรองแบบอัลตราฟิลเตรชันมักใช้ในวิธีการแยกโปรตีน ส่วนผสมการฟอกไตที่จะแยกจะถูกใส่ในถุงฟอกไตที่ทำจากเมมเบรนแบบกึ่งซึมผ่านได้ จากนั้นจึงแช่ในสารละลายฟอกไตเพื่อการแยกตัว อัลตราฟิลเตรชันเป็นกระบวนการส่งน้ำและโมเลกุลขนาดเล็กอื่นๆ โดยใช้แรงเหวี่ยงหรือความดันในเมมเบรนแบบกึ่งซึมผ่านได้ และกักโปรตีนไว้ในเมมเบรนแบบกึ่งซึมผ่านได้ ทั้งสองวิธีนี้สามารถแยกออกจากโมเลกุลขนาดใหญ่ที่มีโปรตีนและโมเลกุลขนาดเล็กที่มีเกลืออนินทรีย์ โดยมักจะนำไปใส่เกลือ โดยใช้ร่วมกับวิธีการละลายเกลือ หรืออาจแนะนำให้นำทั้งสองวิธีนี้ออกหลังจากทำการเกลือโดยใช้สารละลายเกลืออนินทรีย์แล้ว

1. วิธีทำให้โปรตีนบริสุทธิ์โดยวิธีเติมเกลือ: พื้นฐานของวิธีเติมเกลือคือความสามารถในการละลายของโปรตีนในสารละลายเกลือเจือจางจะเพิ่มขึ้นตามความเข้มข้นของเกลือที่เพิ่มขึ้น แต่เมื่อความเข้มข้นของเกลือเพิ่มขึ้นถึงค่าที่กำหนด กิจกรรมทางน้ำจะเพิ่มขึ้น การลดลงซึ่งในทางกลับกันอาจทำให้โปรตีนบางชนิดสร้างประจุผ่านพื้นผิวโครงสร้างโมเลกุลค่อยๆ เป็นกลาง และเมมเบรนไฮเดรชั่นจะค่อยๆ ถูกทำลาย ซึ่งในที่สุดอาจทำให้โปรตีนและโมเลกุลที่เกี่ยวข้องเกิดการรวมตัวกันและการตกตะกอนจากสารละลายต่างๆ

2. วิธีการตกตะกอนของตัวทำละลายอินทรีย์: มีเหตุผลสองประการในการลดความสามารถในการละลายของโปรตีนในตัวทำละลายอินทรีย์: วิธีทำให้โปรตีนบริสุทธิ์เป็นสารละลายเกลือโดยมีภาวะขาดน้ำ; ประการที่สอง ค่าคงที่ไดอิเล็กตริกของตัวทำละลายอินทรีย์มากกว่าน้ำสามารถลดลงได้ในตัวทำละลายที่มีขั้ว

3. สารตกตะกอนโปรตีน: โปรตีนในฐานะสารตกตะกอนออกฤทธิ์กับการตกตะกอนของโปรตีนประเภทเดียวหรืออย่างใดอย่างหนึ่งเท่านั้น สารที่พบบ่อยคืออัลคาไลน์ โปรตีน เลคติน และโลหะหนัก

4. การตกตะกอนของโพลีเอทิลีนไกลคอล: วิธีทำให้โพลีเมอร์ที่ไม่ใช่ไอออนิกที่ละลายน้ำได้บริสุทธิ์การทำโปรตีนให้บริสุทธิ์เช่นโพลีเอทิลีนไกลคอลและโซเดียมเดกซ์แทรนซัลเฟตเพื่อตกตะกอนโปรตีน