Усули тозакунии он чӣ гуна астсистемаи тозакунии сафеда? Донистани пайдарпаии рамзгузории ДНК-и сафедаи тозашуда, дидан лозим аст, ки кадом ҳуҷайраҳо ё бофтаҳо дар гени мавриди ҳадаф аз ҳад зиёд ифода карда шудаанд ва тарҳрезии праймерҳои ген барои тақвият додани арфи порчаи ДНК ҳадаф. Ин ба истилоҳ ба даст овардани порчаҳои генҳои мақсаднок аст.

Сохтани вектори экспресс: Дар вектори ифодаи прокариотӣ ё эукариотӣ бо хусусиятҳои худи ифодаи генҳои бадастомада, масъалаи асосии ин марҳила сохтани плазмида ва гени таваҷҷӯҳ ва системаи экспрессия мебошад. Вақти ифодаи прокариотӣ кӯтоҳ аст, арзиши паст ва миқдори зиёди ифода афзалият дорад; ген дар E. coli ифода намешавад ва мушкилот дар оптимизатсияи кодон ба миён меояд. Бо дарназардошти фаъолияти беҳтар ва тоза кардани сафеда, муҳаққиқон экспрессро дар хамиртуруши Пичи интихоб карданд. Ифодаи бомуваффақияти оптимизатсияи кодон муҳим аст.

Усули тозакунии системаи тозакунии сафеда чӣ гуна аст:

1. Бориш.

2. Электрофорез: сафедаи заряднок аз нуқтаи изоэлектрикии худ баландтар ё пасттар аст ва метавонад ба электроди манфӣ ё электроди мусбати майдони барқ ​​​​дар майдони барқ ​​​​кӯчонида шавад. Дастгирии электрофорези филм, электрофорез ва ғайра.

3. Диализ: Усулест, ки ду халтаи диализро барои ҷудо кардани молекулаҳои калон аз сафедаҳо ва пайвастагиҳои органикии молекулавии хурд истифода мебарад.

4. Хроматография: Хроматографияи мубодилаи ион хосиятҳои озоди сафедаҳоро истифода мебарад. Дар зери рН мушаххас зарядҳо ва хосиятҳои сафедаҳо гуногунанд ва онҳоро тавассути хроматографияи мубодилаи ионҳо ҷудо кардан мумкин аст. Дар хроматографияи мубодилаи анион аввал сафедаҳои дорои қувваи манфии кам элюта мешаванд. Элакҳои молекулавӣ, ки бо номи филтратсияи гел маълуманд. Протеинҳои хурд ба сӯрохиҳо дохил мешаванд ва дар онҳо муддати тӯлонӣ мемонанд. Протеинҳои калон наметавонанд ба сӯрохиҳо дохил шаванд ва мустақиман берун раванд.

5. Усули тозакунии он чистсистемаи тозакунии сафеда? Ultracentrifugation: Тозакунии сафеда метавонад барои муайян кардани вазни молекулавӣ истифода шавад ва онро ҳамчун сафеда истифода бурдан мумкин аст. Ташаккули сафедаҳо бо зичии гуногун ҷудо карда мешавад.