Кислотаи нуклеинӣ ба кислотаи дезоксирибонуклеинӣ (ДНК) ва кислотаи рибонуклеинӣ (РНК) тақсим мешавад, ки дар байни онҳо РНК-ро мувофиқи вазифаҳои гуногун ба РНК рибосомӣ (rRNA), паёмнависии РНК (mRNA) ва РНК интиқол (tRNA) тақсим кардан мумкин аст.

ДНК асосан дар ядро, митохондрия ва хлоропластҳо мутамарказ шудааст, дар ҳоле ки РНК асосан дар ситоплазма паҳн шудааст.

Азбаски асосҳои пурин ва асосҳои пиримидин дар кислотаҳои нуклеинӣ пайвандҳои дугона доранд, кислотаҳои нуклеинӣ дорои хусусиятҳои азхудкунии ултрабунафш мебошанд. Азхудкунии ултрабунафш намакҳои натрийи ДНК тақрибан 260 нм аст ва ҷабби он ҳамчун A260 ифода карда мешавад ва он дар чуқурии ҷаббида дар 230 нм ҷойгир аст, бинобар ин метавонад спектроскопияи ултрабунафш истифода шавад. Кислотаҳои нуклеинӣ бо ёрии люминометр микдор ва сифатан муайян карда мешаванд.

Кислотаҳои нуклеинӣ амфолитҳо мебошанд, ки ба поликислотаҳо баробаранд. Кислотаҳои нуклеинро бо истифода аз буферҳои нейтралӣ ё сілтӣ ба анионҳо ҷудо кардан мумкин аст ва дар майдони электрикӣ ҷойгир карда, ба сӯи анод ҳаракат мекунанд. Ин принсипи электрофорез аст.

Принсипҳо ва талаботҳои истихроҷ ва тозакунии кислотаи нуклеинӣ

1. Таъмини якпорчагии сохтори ибтидоии кислотаи нуклеин

2. Бартараф кардани ифлосшавии молекулаҳои дигар (масалан, ба истиснои дахолати РНК ҳангоми истихроҷи ДНК)

3. Дар намунаҳои кислотаи нуклеинӣ набояд ҳалкунандаҳои органикӣ ва консентратсияи баланди ионҳои металлӣ мавҷуд бошанд, ки ферментҳоро бозмедоранд.

4. Кам кардани моддаҳои макромолекулярӣ ба монанди сафедаҳо, полисахаридҳо ва липидҳо ба қадри имкон

Усули истихроҷ ва тозакунии кислотаи нуклеинӣ

1. Усули истихроҷи фенол/хлороформ

Он соли 1956 ихтироъ шудааст. Пас аз коркарди моеъи шикастаи ҳуҷайра ё гомогенати бофтаи бо фенол/хлороформ, ҷузъҳои кислотаи нуклеинӣ, асосан ДНК дар фазаи обӣ ҳал мешаванд, липидҳо асосан дар фазаи органикӣ ва сафедаҳо дар байни ин ду ҷойгиранд. марҳилаҳо.

2. Бориши машрубот

Этанол метавонад қабати гидратсияи кислотаи нуклеинро нест кунад ва гурӯҳи фосфатҳои манфии заряднокро фош кунад ва ионҳои заряди мусбат ба монанди NA﹢ бо гурӯҳи фосфатҳо якҷоя шуда, боришотро ба вуҷуд оранд.

3. Усули сутуни хроматографӣ

Тавассути маводи махсуси адсорбсияи кремний, ДНК метавонад ба таври махсус адсорб карда шавад, дар ҳоле ки РНК ва сафеда метавонанд ба осонӣ гузаранд ва сипас барои пайваст кардани кислотаи нуклеин намаки баланд ва рН-и пастро истифода баранд ва бо намаки паст ва рН баланд барои ҷудо ва тоза кардани нуклеин кислота.

4. Усули крекинги термикии ишќорї

Истихроҷи сілтӣ асосан фарқиятҳои топологии байни плазмидҳои даврии ковалентӣ пӯшида ва хроматини хатиро барои ҷудо кардани онҳо истифода мебарад. Дар шароити сілтӣ, сафедаҳои денатуратшуда ҳал мешаванд.

5. Усули ҷӯшонидани пиролиз

Маҳлули ДНК бо гармӣ коркард карда мешавад, то аз хосиятҳои молекулаҳои хаттии ДНК истифода барад, то порчаҳои ДНК-ро аз преципитате, ки аз сафедаҳои денатуратшуда ва партовҳои ҳуҷайра тавассути центрифуга ташкил карда шудаанд, ҷудо кунад.

6. Усули маҳтобӣ наномагнитӣ

Бо истифода аз нанотехнология барои такмил ва тағир додани сатҳи нанозарраҳои суперпарамагнитӣ, маҳтобҳои наномагнитии оксиди кремнийи суперпарамагнитӣ омода карда мешаванд. Маҳтобҳои магнитӣ метавонанд махсусан дар интерфейси микроскопӣ молекулаҳои кислотаи нуклеинро эътироф ва ба таври муассир пайваст кунанд. Бо истифода аз хосиятҳои суперпарамагнитии наносфераҳои кремний дар зери таъсири намакҳои хаотропӣ (гидрохлориди гуанидин, изотиоцианати гуанидин ва ғ.) ва майдони магнитии беруна ДНК ва РНК аз хун, бофтаҳои ҳайвонот, ғизо, микроорганизмҳои патогенӣ ва дигар намунаҳо ҷудо карда шуданд.