Ҷудокунӣ ва тозакунии сафедаҳо дар таҳқиқот ва татбиқи биохимия ба таври васеъ истифода мешавад ва як маҳорати муҳими амалиётӣ мебошад. Як ҳуҷайраи маъмулии эукариотӣ метавонад ҳазорҳо сафедаҳои гуногун дошта бошад, баъзеҳо хеле бой ва баъзеҳо танҳо якчанд нусха доранд. Барои он ки як чизи муайяне омӯзадпротеин, аввал сафедаро аз дигар сафедаҳо ва молекулаҳои ғайрипротеин тоза кардан лозим аст.

1. Усули намакпартоиипротеин:

Намаки бетараф ба ҳалшавии сафеда таъсири калон мерасонад. Умуман, бо зиёд шудани консентратсияи намак дар консентратсияи пасти намак, ҳалшавандагии сафеда зиёд мешавад. Ин намак номида мешавад; ҳангоме ки консентратсияи намак афзоиш меёбад, Ҳалшавандагии сафеда ба дараҷаҳои гуногун коҳиш меёбад ва паси дигаре ҷудо мешавад. Ин падидаро шӯршавӣ меноманд.

2. Усули stacking нуқтаи изоэлектрикӣ:

Такмили электростатикӣ байни зарраҳо хурдтарин аст, вақте ки сафеда статикӣ аст, бинобар ин ҳалшавандагӣ низ хурдтарин аст. Нуқтаҳои изоэлектрикии сафедаҳои гуногун гуногунанд. РН-и маҳлули кондитсионерро барои расидан ба нуқтаи изоэлектрикии сафеда истифода бурдан мумкин аст, онро ҷамъ кунед, аммо ин усул хеле кам истифода мешавад ва онро бо усули шӯршавӣ якҷоя кардан мумкин аст.

3. Диализ ва ултрафилтратсия:

Диализ мембранаи нимгузарандаро барои ҷудо кардани сафедаҳои андозаҳои гуногуни молекулавӣ истифода мебарад. Усули ултрафилтратсия фишори баланд ё қувваи марказгурезро истифода мебарад, то об ва дигар молекулаҳои хурди ҳалшавандаро аз мембранаи нимгузаранда гузаранд, дар ҳоле кипротеиндар мембрана мемонад. Шумо метавонед андозаҳои гуногуни сӯрохиро интихоб кунед, то сафедаҳои вазнҳои гуногуни молекулавӣ дошта бошед.

4.Усули филтратсияи гел:

Хроматографияи истисноии андоза ё хроматографияи молекулии ҷумбонидан низ номида мешавад, ин яке аз усулҳои муфидтарин барои ҷудо кардани омехтаҳои сафеда аз рӯи андозаи молекулавӣ мебошад. Маводҳои бастабандӣ дар сутун бештар маъмулан гели глюкоза (Sephadex ged) ва гели агарозӣ (гели агарозӣ) мебошанд.

5. Электрофорез:

Дар як ҳолати рН, сафедаҳои гуногунро аз ҳисоби вазнҳои гуногуни молекулавӣ ва зарядҳои гуногун дар майдони электрикӣ ҷудо кардан мумкин аст. Ба электрофорези маҷмӯи изоэлектрикӣ, ки амфолитро ҳамчун интиқолдиҳанда истифода мебарад, диққат додан лозим аст. Ҳангоми электрофорез, амфолит градиенти рН-ро ташкил медиҳад, ки тадриҷан аз электроди мусбат ба электроди манфӣ илова карда мешавад. Вақте ки сафедаи дорои заряди муайян дар он шино мекунад, ба ҳамдигар мерасад. Мавқеи рН-и нуқтаи электрикӣ қатъист ва ин усулро барои таҳлил ва омода кардани сафедаҳои гуногун истифода бурдан мумкин аст.

6. Хроматографияи алоқаи ионӣ:

Ба агентҳои алоқаи ионӣ агентҳои алоқаи катионӣ (масалан, карбоксиметилселлюлоза; CM-cellulose) ва агентҳои алоқаи анионӣ (селлюлозаи диэтиламиноэтил) дохил мешаванд. Ҳангоми гузаштан аз сутуни хроматографияи алоқаи ионӣ, сафеда бо заряди муқобил ба агенти алоқаи ионӣ ба агенти алоқаи ионӣ адсорбсия мешавад ва сипас адсорбсия мешавад.протеинбо тағир додани рН ё қувваи ионӣ элюта мешавад.

7. Хроматографияи наздикӣ:

Хроматографияи наздикӣ як усули бениҳоят муфид барои ҷудо кардани сафедаҳо мебошад. Он аксар вақт танҳо як қадамро талаб мекунад, ки сафедаи муайянро аз омехтаи сафедаи бетартиб бо тозагии баланд тоза кунад.

Ин усул ба пайвастагии мушаххас, на ковалентии сафедаҳои муайян ба молекулаи дигаре, ки лиганд (Лиганд) ном дорад, асос ёфтааст.

Принсипи асосӣ:

сафедаҳо дар омехтаи бесарусомон дар бофтаҳо ё ҳуҷайраҳо мавҷуданд ва ҳар як намуди ҳуҷайра дорои ҳазорҳо сафедаҳои гуногун мебошанд. Аз ин рӯ, фарқияти байни сафедаҳо як қисми муҳими биохимия аст ва он танҳо набуд. Ё маҷмӯи усулҳои тайёр метавонанд ҳама гуна сафедаҳоро аз протеини омехтаи бесарусомон хориҷ кунанд, аз ин рӯ аксар вақт якчанд усулҳоро якҷоя истифода мебаранд.