ప్రోటీన్ల విభజన మరియు శుద్దీకరణ అనేది బయోకెమిస్ట్రీ పరిశోధన మరియు అప్లికేషన్‌లో విస్తృతంగా ఉపయోగించబడుతుంది మరియు ఇది ఒక ముఖ్యమైన కార్యాచరణ నైపుణ్యం. ఒక సాధారణ యూకారియోటిక్ కణం వేలాది విభిన్న ప్రోటీన్‌లను కలిగి ఉంటుంది, కొన్ని చాలా గొప్పవి మరియు కొన్ని కొన్ని కాపీలను మాత్రమే కలిగి ఉంటాయి. ఒక నిర్దిష్ట అధ్యయనం చేయడానికిప్రోటీన్, ఇతర ప్రోటీన్లు మరియు నాన్-ప్రోటీన్ అణువుల నుండి మొదట ప్రోటీన్‌ను శుద్ధి చేయడం అవసరం.

1. సాల్టింగ్-అవుట్ పద్ధతిప్రోటీన్:

తటస్థ ఉప్పు ప్రోటీన్ యొక్క ద్రావణీయతపై గణనీయమైన ప్రభావాన్ని చూపుతుంది. సాధారణంగా, తక్కువ ఉప్పు సాంద్రతలో ఉప్పు సాంద్రత పెరుగుదలతో, ప్రోటీన్ యొక్క ద్రావణీయత పెరుగుతుంది. దీనిని సాల్టింగ్ అంటారు; ఉప్పు సాంద్రత పెరుగుతూనే ఉన్నప్పుడు, ప్రోటీన్ యొక్క ద్రావణీయత వివిధ స్థాయిలకు తగ్గుతుంది మరియు ఒకదాని తర్వాత ఒకటి విడిపోతుంది. ఈ దృగ్విషయాన్ని సాల్టింగ్ అవుట్ అంటారు.

2. ఐసోఎలెక్ట్రిక్ పాయింట్ స్టాకింగ్ పద్ధతి:

ప్రోటీన్ స్థిరంగా ఉన్నప్పుడు కణాల మధ్య ఎలెక్ట్రోస్టాటిక్ వికర్షణ చిన్నది, కాబట్టి ద్రావణీయత కూడా చిన్నది. వివిధ ప్రోటీన్ల యొక్క ఐసోఎలెక్ట్రిక్ పాయింట్లు భిన్నంగా ఉంటాయి. కండిషనింగ్ సొల్యూషన్ యొక్క pH ఒక ప్రోటీన్ యొక్క ఐసోఎలెక్ట్రిక్ పాయింట్‌ను చేరుకోవడానికి ఉపయోగించబడుతుంది, ఇది పేరుకుపోయేలా చేయండి, కానీ ఈ పద్ధతి చాలా అరుదుగా మాత్రమే ఉపయోగించబడుతుంది మరియు సాల్టింగ్-అవుట్ పద్ధతితో కలిపి ఉంటుంది.

3.డయాలసిస్ మరియు అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్:

డయాలసిస్ వివిధ పరమాణు పరిమాణాల ప్రోటీన్లను వేరు చేయడానికి సెమీ-పారగమ్య పొరను ఉపయోగిస్తుంది. అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్ పద్ధతి నీటిని మరియు ఇతర చిన్న ద్రావణ అణువులను సెమీ-పారగమ్య పొర గుండా వెళ్ళేలా చేయడానికి అధిక పీడనం లేదా అపకేంద్ర శక్తిని ఉపయోగిస్తుంది, అయితేప్రోటీన్పొర మీద ఉంటుంది. వేర్వేరు పరమాణు బరువుల ప్రోటీన్‌లను అడ్డగించడానికి మీరు వేర్వేరు రంధ్రాల పరిమాణాలను ఎంచుకోవచ్చు.

4.జెల్ వడపోత పద్ధతి:

సైజ్ ఎక్స్‌క్లూజన్ క్రోమాటోగ్రఫీ లేదా మాలిక్యులర్ సీవ్ క్రోమాటోగ్రఫీ అని కూడా పిలుస్తారు, ఇది పరమాణు పరిమాణం ప్రకారం ప్రోటీన్ మిశ్రమాలను వేరు చేయడానికి అత్యంత ఉపయోగకరమైన పద్ధతుల్లో ఒకటి. కాలమ్‌లో సాధారణంగా ఉపయోగించే ప్యాకింగ్ పదార్థాలు గ్లూకోజ్ జెల్ (సెఫాడెక్స్ జెడ్) మరియు అగరోస్ జెల్ (అగరోస్ జెల్).

5. ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్:

ఒకే pH పరిస్థితిలో, వివిధ ప్రోటీన్లు వాటి వివిధ పరమాణు బరువులు మరియు విద్యుత్ క్షేత్రంలో వేర్వేరు ఛార్జీల కారణంగా వేరు చేయబడతాయి. ఐసోఎలెక్ట్రిక్ సెట్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్‌కు శ్రద్ధ చూపడం విలువ, ఇది క్యారియర్‌గా యాంఫోలైట్‌ను ఉపయోగిస్తుంది. ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ సమయంలో, యాంఫోలైట్ సానుకూల ఎలక్ట్రోడ్ నుండి ప్రతికూల ఎలక్ట్రోడ్‌కు క్రమంగా జోడించబడిన pH ప్రవణతను ఏర్పరుస్తుంది. నిర్దిష్ట ఛార్జ్ ఉన్న ప్రోటీన్ దానిలో ఈదినప్పుడు, అది ఒకదానికొకటి చేరుకుంటుంది. ఎలక్ట్రికల్ పాయింట్ యొక్క pH స్థానం నిరంతరాయంగా ఉంటుంది మరియు వివిధ ప్రోటీన్లను విశ్లేషించడానికి మరియు సిద్ధం చేయడానికి ఈ పద్ధతిని ఉపయోగించవచ్చు.

6.అయాన్ కమ్యూనికేషన్ క్రోమాటోగ్రఫీ:

అయాన్ కమ్యూనికేషన్ ఏజెంట్లలో కాటినిక్ కమ్యూనికేషన్ ఏజెంట్లు (కార్బాక్సిమీథైల్ సెల్యులోజ్; CM-సెల్యులోజ్ వంటివి) మరియు అయానిక్ కమ్యూనికేషన్ ఏజెంట్లు (డైథైలామినోఇథైల్ సెల్యులోజ్) ఉన్నాయి. అయాన్ కమ్యూనికేషన్ క్రోమాటోగ్రఫీ కాలమ్ గుండా వెళుతున్నప్పుడు, అయాన్ కమ్యూనికేషన్ ఏజెంట్‌కు వ్యతిరేక ఛార్జ్ ఉన్న ప్రోటీన్ అయాన్ కమ్యూనికేషన్ ఏజెంట్‌పై శోషించబడుతుంది, ఆపై శోషించబడుతుంది.ప్రోటీన్pH లేదా అయానిక్ బలాన్ని మార్చడం ద్వారా తొలగించబడుతుంది.

7.అఫినిటీ క్రోమాటోగ్రఫీ:

ప్రోటీన్లను వేరు చేయడానికి అనుబంధ క్రోమాటోగ్రఫీ చాలా ఉపయోగకరమైన పద్ధతి. అధిక స్వచ్ఛతతో ఒక గజిబిజి ప్రోటీన్ మిశ్రమం నుండి శుద్ధి చేయడానికి నిర్దిష్ట ప్రోటీన్‌ను వేరు చేయడానికి తరచుగా ఒక అడుగు మాత్రమే అవసరం.

లిగాండ్ (లిగాండ్) అని పిలువబడే మరొక అణువుకు నిర్దిష్ట ప్రోటీన్ల యొక్క సమయోజనీయ బైండింగ్ కంటే నిర్దిష్టంగా ఈ పద్ధతి ఆధారపడి ఉంటుంది.

ప్రాథమిక సూత్రం:

ప్రొటీన్లు కణజాలం లేదా కణాలలో గజిబిజి మిశ్రమంలో ఉంటాయి మరియు ప్రతి రకమైన కణం వేలాది విభిన్న ప్రోటీన్‌లను కలిగి ఉంటుంది. అందువల్ల, ప్రోటీన్ల మధ్య వ్యత్యాసం బయోకెమిస్ట్రీలో ఒక ముఖ్యమైన భాగం, మరియు ఇది ఒంటరిగా లేదు. లేదా రెడీమేడ్ పద్ధతుల సమితి గజిబిజి మిశ్రమ ప్రోటీన్ నుండి ఏ రకమైన ప్రోటీన్‌ను అయినా తొలగించగలదు, కాబట్టి అనేక పద్ధతులు తరచుగా కలయికలో ఉపయోగించబడతాయి.