புரதங்களின் பிரிப்பு மற்றும் சுத்திகரிப்பு உயிர்வேதியியல் ஆராய்ச்சி மற்றும் பயன்பாட்டில் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது மற்றும் இது ஒரு முக்கியமான செயல்பாட்டுத் திறனாகும். ஒரு பொதுவான யூகாரியோடிக் கலமானது ஆயிரக்கணக்கான வெவ்வேறு புரதங்களைக் கொண்டிருக்கலாம், சில மிகவும் வளமானவை மற்றும் சில சில பிரதிகள் மட்டுமே உள்ளன. ஒரு குறிப்பிட்ட படிப்பிற்காகபுரதம், முதலில் மற்ற புரதங்கள் மற்றும் புரதம் அல்லாத மூலக்கூறுகளிலிருந்து புரதத்தை சுத்திகரிக்க வேண்டியது அவசியம்.

1. சால்ட்டிங்-அவுட் முறைபுரதம்:

நடுநிலை உப்பு புரதத்தின் கரைதிறனில் குறிப்பிடத்தக்க விளைவைக் கொண்டுள்ளது. பொதுவாக, குறைந்த உப்பு செறிவின் கீழ் உப்பு செறிவு அதிகரிப்புடன், புரதத்தின் கரைதிறன் அதிகரிக்கிறது. இது உப்பிடுதல் எனப்படும்; உப்பு செறிவு தொடர்ந்து அதிகரிக்கும் போது, ​​புரதத்தின் கரைதிறன் மாறுபட்ட அளவுகளில் குறைகிறது மற்றும் ஒன்றன் பின் ஒன்றாக பிரிக்கப்படுகிறது. இந்த நிகழ்வு உப்பு வெளியேற்றம் என்று அழைக்கப்படுகிறது.

2. ஐசோ எலக்ட்ரிக் பாயிண்ட் ஸ்டாக்கிங் முறை:

புரதம் நிலையானதாக இருக்கும்போது துகள்களுக்கு இடையிலான மின்னியல் விலக்கமானது மிகச் சிறியதாக இருக்கும், எனவே கரைதிறனும் சிறியதாக இருக்கும். பல்வேறு புரதங்களின் ஐசோ எலக்ட்ரிக் புள்ளிகள் வேறுபட்டவை. கண்டிஷனிங் கரைசலின் pH ஆனது ஒரு புரதத்தின் ஐசோஎலக்ட்ரிக் புள்ளியை அடைவதற்குப் பயன்படுத்தப்படலாம், ஆனால் இந்த முறை அரிதாகவே தனியாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது மற்றும் உப்பு-வெளியேற்ற முறையுடன் இணைக்கப்படலாம்.

3. டயாலிசிஸ் மற்றும் அல்ட்ராஃபில்ட்ரேஷன்:

வெவ்வேறு மூலக்கூறு அளவுகளின் புரதங்களைப் பிரிக்க டயாலிசிஸ் அரை-ஊடுருவக்கூடிய சவ்வைப் பயன்படுத்துகிறது. அல்ட்ராஃபில்ட்ரேஷன் முறையானது அதிக அழுத்தம் அல்லது மையவிலக்கு விசையைப் பயன்படுத்தி நீர் மற்றும் பிற சிறிய கரைப்பான மூலக்கூறுகள் அரை-ஊடுருவக்கூடிய சவ்வு வழியாகச் செல்லும்.புரதம்மென்படலத்தில் உள்ளது. வெவ்வேறு மூலக்கூறு எடைகளின் புரதங்களை இடைமறிக்க நீங்கள் வெவ்வேறு துளை அளவுகளைத் தேர்வு செய்யலாம்.

4.ஜெல் வடிகட்டுதல் முறை:

சைஸ் எக்ஸ்க்ளூஷன் க்ரோமடோகிராபி அல்லது மாலிகுலர் சல்லடை குரோமடோகிராபி என்றும் அழைக்கப்படுகிறது, இது மூலக்கூறு அளவின்படி புரத கலவைகளை பிரிக்க மிகவும் பயனுள்ள முறைகளில் ஒன்றாகும். நெடுவரிசையில் பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் பேக்கிங் பொருட்கள் குளுக்கோஸ் ஜெல் (செபாடெக்ஸ் ஜெட்) மற்றும் அகரோஸ் ஜெல் (அகரோஸ் ஜெல்) ஆகும்.

5. எலக்ட்ரோபோரேசிஸ்:

ஒரே pH நிலையில், பல்வேறு புரதங்கள் அவற்றின் வெவ்வேறு மூலக்கூறு எடைகள் மற்றும் மின்சார புலத்தில் வெவ்வேறு கட்டணங்கள் காரணமாக பிரிக்கப்படலாம். ஐசோ எலக்ட்ரிக் செட் எலக்ட்ரோபோரேசிஸுக்கு கவனம் செலுத்துவது மதிப்பு, இது ஒரு ஆம்போலைட்டை ஒரு கேரியராகப் பயன்படுத்துகிறது. எலக்ட்ரோபோரேசிஸின் போது, ​​ஆம்போலைட் நேர்மறை மின்முனையிலிருந்து எதிர்மறை மின்முனைக்கு படிப்படியாக சேர்க்கப்பட்ட pH சாய்வை உருவாக்குகிறது. குறிப்பிட்ட சார்ஜ் கொண்ட புரதம் அதில் நீந்தும்போது, ​​அது ஒன்றையொன்று சென்றடையும். மின் புள்ளியின் pH நிலை இடைவிடாது, பல்வேறு புரதங்களை பகுப்பாய்வு செய்து தயாரிக்க இந்த முறையைப் பயன்படுத்தலாம்.

6.அயன் தொடர்பு குரோமடோகிராபி:

அயனி தொடர்பு முகவர்களில் கேஷனிக் தொடர்பு முகவர்கள் (கார்பாக்சிமெதில் செல்லுலோஸ்; CM-செல்லுலோஸ் போன்றவை) மற்றும் அயோனிக் தொடர்பு முகவர்கள் (டைதிலமினோஎத்தில் செல்லுலோஸ்) ஆகியவை அடங்கும். அயன் தகவல்தொடர்பு நிறமூர்த்த நெடுவரிசை வழியாக செல்லும் போது, ​​அயன் தொடர்பு முகவருக்கு எதிர் மின்னூட்டம் கொண்ட புரதம் அயன் தொடர்பு முகவர் மீது உறிஞ்சப்படுகிறது, பின்னர் உறிஞ்சப்படுகிறது.புரதம்pH அல்லது அயனி வலிமையை மாற்றுவதன் மூலம் நீக்கப்படுகிறது.

7.அஃபினிட்டி குரோமடோகிராபி:

அஃபினிட்டி குரோமடோகிராபி என்பது புரதங்களைப் பிரிக்க மிகவும் பயனுள்ள முறையாகும். அதிக தூய்மையுடன் கூடிய குழப்பமான புரதக் கலவையிலிருந்து சுத்திகரிக்க ஒரு குறிப்பிட்ட புரதத்தைப் பிரிக்க பெரும்பாலும் ஒரே ஒரு படி மட்டுமே தேவைப்படுகிறது.

இந்த முறையானது லிகண்ட் (லிகாண்ட்) எனப்படும் மற்றொரு மூலக்கூறுடன் சில புரதங்களின் கோவலன்ட் பிணைப்பைக் காட்டிலும் குறிப்பிட்டதை அடிப்படையாகக் கொண்டது.

அடிப்படைக் கொள்கை:

புரதங்கள் திசுக்கள் அல்லது உயிரணுக்களில் குழப்பமான கலவையில் உள்ளன, மேலும் ஒவ்வொரு வகை உயிரணுவிலும் ஆயிரக்கணக்கான வெவ்வேறு புரதங்கள் உள்ளன. எனவே, புரதங்களுக்கு இடையிலான வேறுபாடு உயிர் வேதியியலின் ஒரு முக்கிய பகுதியாகும், மேலும் அது தனியாக இல்லை. அல்லது ஆயத்த முறைகளின் தொகுப்பு குழப்பமான கலப்பு புரதத்திலிருந்து எந்த வகையான புரதத்தையும் அகற்றலாம், எனவே பல முறைகள் பெரும்பாலும் இணைந்து பயன்படுத்தப்படுகின்றன.