Utenganishaji na utakaso wa protini hutumiwa sana katika utafiti na matumizi ya biokemia na ni ujuzi muhimu wa uendeshaji. Seli ya yukariyoti ya kawaida inaweza kuwa na maelfu ya protini tofauti, zingine ni tajiri sana na zingine zina nakala chache tu. Ili kujifunza fulaniprotini, ni muhimu kwanza kutakasa protini kutoka kwa protini nyingine na molekuli zisizo za protini.

1. Mbinu ya kuweka chumviprotini:

Chumvi ya neutral ina athari kubwa juu ya umumunyifu wa protini. Kwa ujumla, pamoja na ongezeko la mkusanyiko wa chumvi chini ya mkusanyiko mdogo wa chumvi, umumunyifu wa protini huongezeka. Hii inaitwa salting; wakati ukolezi wa chumvi unaendelea kuongezeka, Umumunyifu wa protini hupungua kwa digrii tofauti na hutenganisha moja baada ya nyingine. Jambo hili linaitwa salting nje.

2. Mbinu ya kuweka alama ya Isoelectric:

Msukosuko wa kielektroniki kati ya chembe ndio mdogo zaidi wakati protini imetulia, kwa hivyo umumunyifu pia ni mdogo zaidi. Pointi za isoelectric za protini anuwai ni tofauti. PH ya ufumbuzi wa hali inaweza kutumika kufikia hatua ya isoelectric ya protini Ifanye ikusanyiko, lakini njia hii haitumiwi peke yake na inaweza kuunganishwa na njia ya salting-out.

3. Dialysis na ultrafiltration:

Dialysis hutumia utando unaoweza kupenyeza nusu ili kutenganisha protini za ukubwa tofauti wa molekuli. Njia ya kuchuja zaidi hutumia shinikizo la juu au nguvu ya katikati kufanya maji na molekuli zingine ndogo za soluti kupita kwenye membrane inayoweza kupenyeza, wakatiprotiniinabaki kwenye membrane. Unaweza kuchagua ukubwa tofauti wa pore ili kukata protini za uzito tofauti wa molekuli.

4.Njia ya uchujaji wa gel:

Pia huitwa kromatografia ya kutengwa kwa ukubwa au kromatografia ya ungo wa Masi, hii ni mojawapo ya mbinu muhimu zaidi za kutenganisha michanganyiko ya protini kulingana na ukubwa wa molekuli. Vifaa vya kufunga vinavyotumiwa zaidi kwenye safu ni gel ya glucose (Sephadex ged) na gel ya agarose (gel ya agarose).

5. Electrophoresis:

Chini ya hali sawa ya pH, protini mbalimbali zinaweza kutenganishwa kutokana na uzito wao tofauti wa molekuli na chaji tofauti katika uwanja wa umeme. Inafaa kulipa kipaumbele kwa electrophoresis ya kuweka isoelectric, ambayo hutumia ampholyte kama carrier. Wakati wa electrophoresis, ampholyte huunda gradient pH hatua kwa hatua aliongeza kutoka electrode chanya kwa electrode hasi. Wakati protini yenye malipo fulani inaogelea ndani yake, itafikia kila mmoja. Msimamo wa pH wa uhakika wa umeme hauendelei, na njia hii inaweza kutumika kuchambua na kuandaa protini mbalimbali.

6. Kromatografia ya mawasiliano ya Ion:

mawakala wa mawasiliano ya ioni ni pamoja na mawakala wa mawasiliano ya cationic (kama vile selulosi ya carboxymethyl; CM-cellulose) na anionic mawakala wa mawasiliano (diethylaminoethyl cellulose). Wakati wa kupitia safu ya kromatografia ya mawasiliano ya ioni, protini iliyo na chaji kinyume na wakala wa mawasiliano ya ioni hutangazwa kwenye wakala wa mawasiliano wa ioni, na kisha kutangazwa.protinihutolewa kwa kubadilisha pH au nguvu ya ionic.

7. Kromatografia ya mshikamano:

Kromatografia ya mshikamano ni njia muhimu sana ya kutenganisha protini. Mara nyingi inahitaji hatua moja tu kutenganisha protini fulani ili kutakaswa kutoka kwa mchanganyiko wa protini yenye uchafu na usafi wa juu.

Njia hii inategemea ufungaji maalum badala ya ushirikiano wa protini fulani kwa molekuli nyingine inayoitwa ligand (Ligand).

Kanuni ya msingi:

protini zipo katika mchanganyiko wa fujo katika tishu au seli, na kila aina ya seli ina maelfu ya protini tofauti. Kwa hiyo, tofauti kati ya protini ni sehemu muhimu ya biochemistry, na haijawa peke yake. Au seti ya mbinu zilizopangwa tayari zinaweza kuondoa aina yoyote ya protini kutoka kwa protini iliyochanganywa yenye fujo, hivyo mbinu kadhaa hutumiwa mara nyingi kwa pamoja.