Grovseparering och finseparation av proteinrening

Separation och rening av proteiner används i stor utsträckning inom biokemiforskning och tillämpning och är en viktig operativ färdighet. SCG Protein Purification System Company-Saipu Instrument har sammanställt innehållet av råseparation och finseparation förproteinrening för alla. En typisk eukaryot cell kan innehålla tusentals olika proteiner, vissa är mycket rika och vissa innehåller bara några få exemplar. För att studera ett visst protein är det nödvändigt att först rena proteinet från andra proteiner och icke-proteinmolekyler.

19

Grov separation

När proteinextraktet (ibland blandat med nukleinsyror, polysackarider, etc.) erhålls, väljs en uppsättning lämpliga metoder för att separera de önskadeproteinfrån andra föroreningar. I allmänhet använder detta separationssteg metoder såsom utsaltning, isoelektrisk punktackumulering och organisk lösningsmedelsfraktionering. Dessa metoder kännetecknas av enkelhet och stor bearbetningskapacitet, vilket kan ta bort många föroreningar och koncentrera proteinlösningen. Vissa proteinextrakt är stora i volym och är inte lämpliga för koncentration genom ackumulering eller utsaltning. Du kan välja ultrafiltrering, gelfiltrering, frysvakuumtorkning eller andra metoder för koncentration.

Fin separation

Efter grovfraktioneringen av provet är volymen i allmänhet liten och de flesta föroreningarna har avlägsnats. För ytterligare rening inkluderar kromatografimetoder i allmänhet gelfiltrering, jonbyteskromatografi, adsorptionskromatografi och affinitetskromatografi. Vid behov kan man även välja elektrofores, inklusive zonelektrofores, isoelektrisk punktuppsättning etc. som slutreningsprocess. Metoden som används för indelningsnivåseparation är i allmänhet liten i planeringen, men med hög upplösning.

Kristallisering är den sista processen för proteinseparation och rening. Även om kristalliseringsprocessen inte säkerställer att proteinet måste vara enhetligt, är det bara när ett visst protein har en fördel i lösningen att bilda en kristall. Själva kristalliseringsprocessen åtföljs av en viss grad av rening, och omkristallisering kan ta bort en liten mängd förfalskat protein. Sedan denatureradproteinhar aldrig hittats under kristalliseringsprocessen, är proteinkristallisation inte bara ett tecken på renhet, utan också en kraftfull riktlinje för att fastställa att produkten är i sitt naturliga tillstånd.


Posttid: 19 november 2020