Naon metode purifikasi tinaSistim purifikasi protéin? Perlu terang coding sekuen DNA tina protéin anu dimurnikeun, pikeun ningali sél atanapi jaringan mana anu overexpressed dina gén target, sareng mendesain primer gen pikeun ngagedékeun arf tina fragmen DNA target. Ieu nu disebut akuisisi fragmen gén target.

Konstruksi véktor éksprési: Dina véktor éksprési prokariot atanapi eukariot kalayan karakteristik éksprési gén sorangan, masalah utama léngkah ieu nyaéta ngawangun plasmid sareng gen anu dipikaresep, sareng sistem éksprési. Waktu éksprési prokariot pondok, biayana rendah, sareng jumlah éksprési anu ageung mangrupikeun prioritas; gén teu dinyatakeun dina E. coli, jeung masalah lumangsung dina optimasi kodon. Dina tinimbangan aktivitas hadé tur purifikasi protéin, peneliti milih nganyatakeun dina ragi Pichi. Éksprési suksés optimasi kodon penting.

Naon metode purifikasi tina sistem purifikasi protéin:

1. Curah hujan.

2. Éléktroforésis: A protéin boga muatan leuwih luhur atawa leuwih handap titik isoelektrik sarta bisa dipindahkeun ka éléktroda négatip atawa éléktroda positif tina médan listrik dina médan listrik. Rojongan Éléktroforésis pilem, Éléktroforésis, jsb.

3. Dialisis: Métode anu ngagunakeun dua kantong dialisis pikeun misahkeun molekul badag tina protéin jeung sanyawa organik molekular leutik.

4. Kromatografi: Kromatografi penukar ion ngagunakeun sipat bébas protéin. Dina pH husus, muatan jeung sipat protéin béda, sarta maranéhna bisa dipisahkeun ku kromatografi bursa ion. Dina kromatografi tukeran anion, protéin nu boga kakuatan négatif handap diélusi heula. Ayakan molekular, ogé katelah filtrasi gél. Protéin leutik asup kana pori-pori sarta cicing di dinya pikeun lila. Protéin badag teu bisa asup ka pori sarta ngalir kaluar langsung.

5. Naon métode purifikasi tinaSistim purifikasi protéin? Ultracentrifugation: Purifikasi protéin tiasa dianggo pikeun nangtukeun beurat molekular sareng tiasa dianggo salaku protéin. Wangunan protéin kalawan dénsitas béda dipisahkeun.