Asam nukléat dibagi jadi asam déoksiribonukleat (DNA) jeung asam ribonukleat (RNA), diantarana RNA bisa dibagi jadi RNA ribosom (rRNA), RNA messenger (mRNA) jeung RNA mindahkeun (tRNA) nurutkeun fungsi nu béda.

DNA utamana ngumpul dina inti, mitokondria jeung kloroplas, sedengkeun RNA utamana disebarkeun dina sitoplasma.

Kusabab basa purin jeung basa pirimidin boga beungkeut ganda konjugasi dina asam nukléat, asam nukléat boga ciri nyerep ultraviolét. Nyerep ultraviolét uyah natrium DNA sakitar 260nm, sareng nyerepna dinyatakeun salaku A260, sareng éta aya dina panyerapan dina 230nm, ku kituna spéktroskopi ultraviolét tiasa dianggo. Asam nukléat sacara kuantitatif sareng kualitatif ditangtukeun ku luminometer.

Asam nukléat nyaéta amfolit, anu sarua jeung poliasam. Asam nukléat bisa disosiasi jadi anion ku cara maké panyangga nétral atawa basa, sarta disimpen dina médan listrik pikeun pindah ka arah anoda. Ieu prinsip éléktroforésis.

Ékstraksi asam nukléat sareng prinsip purifikasi sareng syarat

1. Mastikeun integritas struktur primér asam nukléat

2. Ngaleungitkeun kontaminasi molekul séjén (sapertos teu kalebet gangguan RNA nalika ékstrak DNA)

3. Teu kudu aya pangleyur organik jeung konsentrasi luhur ion logam nu ngahambat énzim dina sampel asam nukléat

4. Ngurangan zat makromolekul saperti protéin, polisakarida jeung lipid saloba mungkin.

Ékstraksi asam nukléat jeung métode purifikasi

1. Métode ékstraksi fenol / kloroform

Ieu nimukeun dina 1956. Saatos ngubaran sél rusak cair atawa homogenate jaringan jeung fénol / kloroform, komponén asam nukléat, utamana DNA, nu leyur dina fase cai, lipid utamana dina fase organik, sarta protéin anu lokasina antara dua. fase.

2. présipitasi alkohol

Étanol tiasa ngaleungitkeun lapisan hidrasi asam nukléat sareng ngalaan gugus fosfat anu muatanana négatif, sareng ion anu bermuatan positif sapertos NA﹢ tiasa ngagabung sareng gugus fosfat pikeun ngabentuk endapan.

3. Métode kolom kromatografi

Ngaliwatan bahan adsorption dumasar silika husus, DNA bisa husus adsorbed, bari RNA jeung protéin bisa ngaliwatan mulus, lajeng nganggo uyah tinggi na pH low pikeun meungkeut asam nukléat, sarta elute kalawan uyah lemah sareng pH tinggi pikeun misahkeun jeung purify nukléat. asam.

4. Métode alkali cracking termal

Ékstraksi basa utamana ngagunakeun béda topologi antara plasmid sirkular katutup sacara kovalén jeung kromatin linier pikeun misahkeunana. Dina kaayaan basa, protéin denatured téh leyur.

5. Métode pirolisis ngagolak

Solusi DNA dipanaskeun pikeun ngamangpaatkeun sipat molekul DNA linier pikeun misahkeun fragmen DNA tina endapan anu dibentuk ku protéin anu didénaturasi sareng lebu sélular ku sentrifugasi.

6. Metoda manik nanomagnétik

Ngagunakeun nanotéhnologi pikeun ngaronjatkeun tur ngaropéa beungeut nanopartikel superparamagnetic, superparamagnetic silikon oksida nano-magnét manik anu disiapkeun. Manik magnét sacara khusus tiasa mikawanoh sareng éfisién ngabeungkeut molekul asam nukléat dina antarmuka mikroskopis. Ngagunakeun sipat superparamagnetic nanospheres silika, dina aksi uyah Chaotropic (guanidine hydrochloride, guanidine isothiocyanate, jsb) jeung médan magnét éksternal, DNA jeung RNA diisolasi tina getih, jaringan sato, kadaharan, mikroorganisme patogén jeung sampel lianna.