Pemisahan sareng purifikasi protéin seueur dianggo dina panalungtikan sareng aplikasi biokimia sareng mangrupikeun kaahlian operasional anu penting. Sél eukariot has bisa ngandung rébuan protéin béda, sababaraha pisan euyeub tur sababaraha ngandung ukur sababaraha salinan. Dina raraga diajar tangtuprotéin, perlu pikeun ngamurnikeun heula protéin tina protéin sanés sareng molekul non-protéin.

1. Salting-kaluar métode tinaprotéin:

Uyah nétral gaduh pangaruh anu signifikan dina kaleyuran protéin. Sacara umum, kalawan ngaronjatna konsentrasi uyah dina konsentrasi uyah low, kaleyuran protéin naek. Ieu disebut salting; lamun konsentrasi uyah terus ningkat, The kaleyuran protéin nurun ka varying derajat sarta misahkeun kaluar hiji sanggeus sejen. Fenomena ieu disebut salting out.

2. Metode stacking titik isoelektrik:

Répulsi éléktrostatik antara partikel nyaéta pangleutikna nalika protéinna statik, ku kituna kalarutan ogé pangleutikna. Titik isoelektrik tina sababaraha protéin béda. pH solusi udar bisa dipaké pikeun ngahontal titik isoelektrik protéin Jadi ngumpulkeun, tapi metoda ieu jarang dipaké nyalira tur bisa digabungkeun jeung métode salting-kaluar.

3. Dialisis sareng ultrafiltrasi:

Dialisis ngagunakeun mémbran semi-permeabel pikeun misahkeun protéin tina ukuran molekul anu béda. Métode ultrafiltrasi ngagunakeun tekanan tinggi atawa gaya centrifugal pikeun nyieun cai jeung molekul solute leutik lianna ngaliwatan mémbran semi-permeabel, bariprotéintetep dina mémbran. Anjeun tiasa milih ukuran pori anu béda pikeun ngahalangan protéin tina beurat molekul anu béda.

4. Métode filtration gél:

Disebut oge kromatografi pangaluaran ukuran atawa kromatografi ayakan molekular, ieu salah sahiji cara nu pang gunana pikeun misahkeun campuran protéin nurutkeun ukuran molekul. Bahan pembungkus anu paling sering dianggo dina kolom nyaéta gél glukosa (Sephadex ged) sareng gél agarose (gél agarose).

5. Éléktroforésis:

Dina kaayaan pH anu sarua, rupa-rupa protéin bisa dipisahkeun alatan beurat molekular béda jeung muatan béda dina médan listrik. Éta patut nengetan éléktroforésis set isoelektrik, anu nganggo amfolit salaku pamawa. Salila éléktroforésis, amfolit ngabentuk gradién pH saeutik demi saeutik ditambahkeun ti éléktroda positif kana éléktroda négatip. Nalika protéin kalayan muatan anu tangtu ngojay di jerona, éta bakal saling. Posisi pH titik listrik henteu terus-terusan, sareng metode ieu tiasa dianggo pikeun nganalisa sareng nyiapkeun rupa-rupa protéin.

6. Kromatografi komunikasi ion:

agén komunikasi ion ngawengku agén komunikasi kationik (saperti carboxymethyl cellulose; CM-selulosa) jeung agén komunikasi anionik (diethylaminoethyl cellulose). Nalika ngaliwatan kolom kromatografi komunikasi ion, protéin kalawan muatan sabalikna mun agén komunikasi ion ieu adsorbed dina agén komunikasi ion, lajeng adsorbed nu.protéindielusi ku cara ngarobah pH atawa kakuatan ionik.

7. Afinitas kromatografi:

Kromatografi afinitas mangrupikeun metode anu mangpaat pisan pikeun misahkeun protéin. Ieu sering merlukeun ngan hiji hambalan misahkeun protéin tangtu dimurnikeun tina campuran protéin pabalatak kalawan purity tinggi.

Métode ieu dumasar kana beungkeutan spésifik tinimbang kovalén protéin tangtu kana molekul séjén anu disebut ligan (Ligand).

Prinsip dasarna:

protéin aya dina campuran pabalatak dina jaringan atawa sél, sarta unggal jenis sél ngandung rébuan protéin béda. Ku alatan éta, bédana antara protéin mangrupa bagian penting biokimia, sarta eta teu acan nyalira. Atanapi sakumpulan metode anu siap-siap tiasa ngaleungitkeun protéin naon waé tina protéin campuran anu pabalatak, ku kituna sababaraha metode sering dianggo dina kombinasi.