Одвајање и пречишћавање протеина се широко користи у биохемијском истраживању и примени и представља важну оперативну вештину. Типична еукариотска ћелија може да садржи хиљаде различитих протеина, неки су веома богати, а неки садрже само неколико копија. Да би се изучио одређенипротеина, потребно је прво пречистити протеин од других протеина и непротеинских молекула.

1. Метода сољењапротеина:

Неутрална со има значајан утицај на растворљивост протеина. Генерално, са повећањем концентрације соли под ниском концентрацијом соли, растворљивост протеина се повећава. Ово се зове сољење; када концентрација соли настави да расте, растворљивост протеина се смањује у различитим степенима и одваја се један за другим. Ова појава се назива сољење.

2. Метода слагања изоелектричних тачака:

Електростатичко одбијање између честица је најмање када је протеин статичан, па је и растворљивост најмања. Изоелектричне тачке различитих протеина су различите. пХ раствора за кондиционирање може се користити за достизање изоелектричне тачке протеина. Учините да се акумулира, али овај метод се ретко користи сам и може се комбиновати са методом исољавања.

3. Дијализа и ултрафилтрација:

Дијализа користи полупропусну мембрану за одвајање протеина различитих молекулских величина. Метода ултрафилтрације користи висок притисак или центрифугалну силу да би вода и други мали молекули растворених материја прошли кроз полупропусну мембрану, докпротеинаостаје на мембрани. Можете одабрати различите величине пора за пресретање протеина различите молекуларне тежине.

4. Метода гел филтрације:

Такође се назива хроматографија искључивања величине или хроматографија на молекуларном ситу, ово је једна од најкориснијих метода за одвајање протеинских смеша према величини молекула. Најчешће коришћени материјали за паковање у колони су глукозни гел (Сепхадек гед) и агарозни гел (агарозни гел).

5.Електрофореза:

Под истим пХ условима, различити протеини се могу раздвојити због њихове различите молекулске тежине и различитих наелектрисања у електричном пољу. Вреди обратити пажњу на електрофорезу изоелектричног сета, која користи амфолит као носач. Током електрофорезе, амфолит формира пХ градијент који се постепено додаје од позитивне електроде до негативне електроде. Када протеин са одређеним набојем плива у њему, стићи ће један до другог. пХ положај електричне тачке је дисконтинуиран, и овај метод се може користити за анализу и припрему различитих протеина.

6. Јонска комуникациона хроматографија:

јонски комуникациони агенси укључују катјонске комуникационе агенсе (као што је карбоксиметил целулоза; ЦМ-целулоза) и ањонске комуникационе агенсе (диетиламиноетил целулоза). Приликом проласка кроз колону за јонску комуникациону хроматографију, протеин са супротним наелектрисањем у односу на агенс за јонску комуникацију се адсорбује на агенс за јонску комуникацију, а затим се адсорбујепротеинасе елуира променом пХ или јонске снаге.

7. Афинитетна хроматографија:

Афинитетна хроматографија је изузетно корисна метода за одвајање протеина. Често је потребан само један корак да се одређени протеин одвоји од неуредне протеинске мешавине високе чистоће.

Овај метод се заснива на специфичном, а не ковалентном везивању одређених протеина за други молекул који се зове лиганд (Лиганд).

Основни принцип:

протеини постоје у неуредној мешавини у ткивима или ћелијама, а сваки тип ћелије садржи хиљаде различитих протеина. Стога је разлика између протеина важан део биохемије и није била сама. Или скуп готових метода може да уклони било коју врсту протеина из неуредног мешаног протеина, тако да се неколико метода често користи у комбинацији.