Acidi nukleik ndahet në acid deoksiribonukleik (ADN) dhe acid ribonukleik (ARN), ndër të cilët ARN mund të ndahet në ARN ribozomale (rARN), ARN lajmëtare (mARN) dhe ARN transferuese (tARN) sipas funksioneve të ndryshme.

ADN-ja është e përqendruar kryesisht në bërthamë, mitokondri dhe kloroplaste, ndërsa ARN-ja shpërndahet kryesisht në citoplazmë.

Për shkak se bazat purine dhe bazat pirimidine kanë lidhje të dyfishta të konjuguara në acidet nukleike, acidet nukleike kanë karakteristikat e përthithjes ultravjollcë. Thithja ultravjollcë e kripërave të natriumit të ADN-së është rreth 260 nm, dhe absorbimi i saj shprehet si A260 dhe është në kufirin e përthithjes në 230 nm, kështu që mund të përdoret spektroskopia ultravjollcë. Acidet nukleike përcaktohen në mënyrë sasiore dhe cilësore nga një luminometër.

Acidet nukleike janë amfolite, të cilat janë ekuivalente me poliacidet. Acidet nukleike mund të shpërndahen në anione duke përdorur tamponë neutrale ose alkaline dhe të vendosen në një fushë elektrike për të lëvizur drejt anodës. Ky është parimi i elektroforezës.

Parimet dhe kërkesat e nxjerrjes dhe pastrimit të acidit nukleik

1. Siguroni integritetin e strukturës parësore të acidit nukleik

2. Eliminoni kontaminimin e molekulave të tjera (si p.sh. përjashtimi i ndërhyrjes së ARN-së gjatë nxjerrjes së ADN-së)

3. Nuk duhet të ketë tretës organikë dhe përqendrime të larta të joneve metalike që pengojnë enzimat në mostrat e acidit nukleik

4. Reduktoni sa më shumë substancat makromolekulare si proteinat, polisaharidet dhe lipidet

Metoda e nxjerrjes dhe pastrimit të acidit nukleik

1. Metoda e nxjerrjes së fenolit/kloroformit

Ajo u shpik në vitin 1956. Pas trajtimit të lëngut të thyer të qelizës ose homogjenatit të indeve me fenol/kloroform, përbërësit e acidit nukleik, kryesisht ADN-ja, treten në fazën ujore, lipidet janë kryesisht në fazën organike dhe proteinat janë të vendosura midis të dyve. fazat.

2. Reshjet e alkoolit

Etanoli mund të eliminojë shtresën e hidratimit të acidit nukleik dhe të ekspozojë grupin e fosfatit të ngarkuar negativisht, dhe jonet e ngarkuar pozitivisht si NA﹢ mund të kombinohen me grupin e fosfatit për të formuar një precipitat.

3. Metoda e kolonës kromatografike

Nëpërmjet materialit special të përthithjes me bazë silice, ADN-ja mund të absorbohet në mënyrë specifike, ndërsa ARN dhe proteina mund të kalojnë pa probleme, dhe më pas të përdorin kripë të lartë dhe pH të ulët për të lidhur acidin nukleik dhe elurat me kripë të ulët dhe pH të lartë për të ndarë dhe pastruar nukleiken acid.

4. Metoda alkali e plasaritjes termike

Nxjerrja alkaline përdor kryesisht ndryshimet topologjike midis plazmideve rrethore të mbyllura kovalente dhe kromatinës lineare për t'i ndarë ato. Në kushte alkaline, proteinat e denatyruara janë të tretshme.

5. Metoda e pirolizës së zierjes

Zgjidhja e ADN-së trajtohet me nxehtësi për të përfituar nga vetitë e molekulave lineare të ADN-së për të ndarë fragmentet e ADN-së nga precipitati i formuar nga proteinat e denatyruara dhe mbeturinat qelizore me centrifugim.

6. Metoda e rruazave nanomagnetike

Duke përdorur nanoteknologjinë për të përmirësuar dhe modifikuar sipërfaqen e nanogrimcave superparamagnetike, përgatiten rruaza nanomagnetike të oksidit të silikonit superparamagnetike. Rruazat magnetike mund të njohin dhe lidhen në mënyrë efikase me molekulat e acidit nukleik në një ndërfaqe mikroskopike. Duke përdorur vetitë superparamagnetike të nanosferave të silicës, nën veprimin e kripërave kaotropike (hidroklorur guanidine, izotiocianate guanidine, etj.) dhe një fushë magnetike të jashtme, ADN dhe ARN u izoluan nga gjaku, indet e kafshëve, ushqimi, mikroorganizmat patogjenë dhe mostra të tjera.