Ndarja dhe pastrimi i proteinave përdoret gjerësisht në kërkimin dhe aplikimin biokimik dhe është një aftësi e rëndësishme operacionale. Një qelizë tipike eukariote mund të përmbajë mijëra proteina të ndryshme, disa janë shumë të pasura dhe disa përmbajnë vetëm disa kopje. Për të studiuar një të caktuarproteina, është e nevojshme që fillimisht të pastrohet proteina nga proteinat e tjera dhe molekulat joproteinike.

1. Metoda e kriposjes sëproteina:

Kripa neutrale ka një efekt të rëndësishëm në tretshmërinë e proteinave. Në përgjithësi, me rritjen e përqendrimit të kripës nën përqendrim të ulët të kripës, tretshmëria e proteinave rritet. Kjo quhet kriposje; kur përqendrimi i kripës vazhdon të rritet, tretshmëria e proteinave zvogëlohet në shkallë të ndryshme dhe ndahet njëra pas tjetrës. Ky fenomen quhet kriposja.

2. Metoda e grumbullimit të pikave izoelektrike:

Repulsioni elektrostatik midis grimcave është më i vogli kur proteina është statike, kështu që tretshmëria është gjithashtu më e vogla. Pikat izoelektrike të proteinave të ndryshme janë të ndryshme. PH i tretësirës së kondicionimit mund të përdoret për të arritur pikën izoelektrike të një proteine ​​Bëjeni atë të grumbullohet, por kjo metodë përdoret rrallë e vetme dhe mund të kombinohet me metodën e kriposjes.

3. Dializa dhe ultrafiltrimi:

Dializa përdor një membranë gjysmë të përshkueshme për të ndarë proteinat me madhësi të ndryshme molekulare. Metoda e ultrafiltrimit përdor presion të lartë ose forcë centrifugale për të bërë që uji dhe molekulat e tjera të vogla të tretura të kalojnë përmes një membrane gjysmë të përshkueshme, ndërsaproteinambetet në membranë. Ju mund të zgjidhni madhësi të ndryshme pore për të kapur proteina me peshë të ndryshme molekulare.

4. Metoda e filtrimit me xhel:

E quajtur edhe kromatografia me përjashtim të madhësisë ose kromatografia me sitë molekulare, kjo është një nga metodat më të dobishme për ndarjen e përzierjeve të proteinave sipas madhësisë molekulare. Materialet e paketimit më të përdorura në kolonë janë xheli i glukozës (Sephadex ged) dhe xhel agarozë (xhel agarozë).

5.Elektroforeza:

Në të njëjtin kusht pH, proteina të ndryshme mund të ndahen për shkak të peshave të ndryshme molekulare dhe ngarkesave të ndryshme në fushën elektrike. Vlen t'i kushtohet vëmendje elektroforezës së grupit izoelektrik, i cili përdor një amfolit si bartës. Gjatë elektroforezës, amfoliti formon një gradient pH që shtohet gradualisht nga elektroda pozitive në elektrodën negative. Kur proteina me një ngarkesë të caktuar noton në të, ajo do të arrijë njëra-tjetrën. Pozicioni pH i pikës elektrike është i ndërprerë dhe kjo metodë mund të përdoret për të analizuar dhe përgatitur proteina të ndryshme.

6. Kromatografia e komunikimit jonik:

Agjentët e komunikimit jonik përfshijnë agjentët e komunikimit kationik (siç është celuloza karboksimetil; CM-celuloza) dhe agjentët e komunikimit anionik (celuloza dietilaminoetil). Kur kalon nëpër kolonën e kromatografisë së komunikimit jonik, proteina me ngarkesë të kundërt me agjentin e komunikimit jonik absorbohet në agjentin e komunikimit jonik dhe më pas absorbohetproteinaelurohet duke ndryshuar pH ose forcën jonike.

7. Kromatografia e afinitetit:

Kromatografia e afinitetit është një metodë jashtëzakonisht e dobishme për ndarjen e proteinave. Shpesh kërkon vetëm një hap për të ndarë një proteinë të caktuar për t'u pastruar nga një përzierje e çrregullt e proteinave me pastërti të lartë.

Kjo metodë bazohet në lidhjen specifike dhe jo në kovalente të disa proteinave me një molekulë tjetër të quajtur ligand (Ligand).

Parimi themelor:

proteinat ekzistojnë në një përzierje të çrregullt në inde ose qeliza, dhe çdo lloj qelize përmban mijëra proteina të ndryshme. Prandaj, dallimi midis proteinave është një pjesë e rëndësishme e biokimisë dhe nuk ka qenë vetëm. Ose një grup metodash të gatshme mund të heqin çdo lloj proteine ​​nga një proteinë e përzier e çrregullt, kështu që shpesh përdoren disa metoda të kombinuara.