Kala-soocidda iyo nadiifinta borotiinka ayaa si weyn loogu isticmaalaa cilmi-baarista biochemistry iyo codsiga waana xirfad hawleed oo muhiim ah. Unugga caadiga ah ee eukaryotic waxa uu ka koobnaan karaa kumanaan borotiinno kala duwan ah, qaar aad bay hodan u yihiin qaarna waxay ka kooban yihiin dhawr nuqul oo keliya. Si loo barto wax gaar ahborotiinka, waa lagama maarmaan in marka hore laga nadiifiyo borotiinka borotiinnada kale iyo unugyada aan borotiinka ahayn.

1. Habka cusbayn eeborotiinka:

Cusbada dhexdhexaadka ah waxay saameyn weyn ku leedahay milanka borotiinka. Guud ahaan, korodhka xoogga milixda ee hoos u dhigista milixda yar, milanka borotiinku wuu kordhaa. Tan waxa loo yaqaan milix; marka fiirsashada milixdu ay sii korodho, milanka borotiinku wuxuu hoos u dhacaa heerar kala duwan oo kala sooca midba midka kale. Dhacdadan waxa loo yaqaan milix.

2. Habka isugaynta barta Isoelectric:

Dib-u-celinta elektrostatic-ka ee u dhexeeya qaybaha ayaa ah kan ugu yar marka borotiinku taagan yahay, sidaa daraadeed milanka ayaa sidoo kale ah kan ugu yar. Qodobbada isoelectric ee borotiinno kala duwan ayaa kala duwan. pH ee xalinta qaboojiyaha waxaa loo isticmaali karaa si loo gaaro barta isoelectric ee borotiinka Samee ururinta, laakiin habkan ayaa dhif ah loo isticmaalo kaligiis waxaana lagu dari karaa habka milixda.

3. Dialysis iyo ultrafiltration:

Sifeynta kaadida waxay isticmaashaa xuub yar-yar si ay u kala soocdo borotiinnada cabbirrada unugyada kala duwan. Habka ultrafiltration wuxuu isticmaalaa cadaadis sare ama xooga centrifugal si uu biyaha iyo molecules kale ee yar yar ee solute-ku u dhex maraan xuub yar-yar, halkaborotiinkaku hadhaa xuubka. Waxaad dooran kartaa cabbirro daldaloolo kala duwan si aad uga hortagto borotiinnada miisaannada unugyada kala duwan.

4. Habka sifaynta jel:

Waxa kale oo loo yaqaan chromatography ka saarista cabbirka ama chromatography shaandhada molecular, tani waa mid ka mid ah hababka ugu faa'iidada badan ee lagu kala saaro isku dhafka borotiinka iyadoo loo eegayo cabbirka unugyada. Qalabka baakadaha inta badan la isticmaalo ee tiirka ku jira waa gulukoos jel (Sephadex ged) iyo jel agarose (jel agarose).

5.Electrophoresis:

Marka la eego isla xaaladda pH, borotiinno kala duwan ayaa la kala saari karaa sababtoo ah miisaankooda unugyada kala duwan iyo kharashyada kala duwan ee goobta korontada. Waxaa habboon in fiiro gaar ah loo yeesho qalabka elektrophoresis ee isoelectric, kaas oo isticmaala ampholyte sida side. Inta lagu jiro electrophoresis, ampholyte-ku wuxuu sameeyaa gradient pH si tartiib tartiib ah looga daray korantada togan ilaa electrode taban. Marka borotiinka leh qadar go'an uu ku dabaalanayo, way is gaadhayaan. Meesha pH ee barta korantada waa la joojinayaa, habkan waxaa loo isticmaali karaa in lagu falanqeeyo oo lagu diyaariyo borotiinno kala duwan.

6.Ion chromatography isgaarsiinta:

Wakiilada isgaarsiinta ion waxaa ka mid ah wakiilada isgaarsiinta cationic (sida carboxymethyl cellulose, CM-cellulose) iyo wakiilada isgaarsiinta anionic (diethylaminoethyl cellulose). Marka la dhex maro tiirka chromatography isgaarsiinta ion, borotiinka leh khidmadda ka soo horjeeda wakiilka isgaarsiinta ion ayaa lagu dhejiyaa wakiilka isgaarsiinta ion, ka dibna waa la dhajiyaa.borotiinkawaxaa lagu daboolaa beddelka pH ama xoogga ionic.

7.Kromatography isku xidhka:

chromatography affinity waa hab aad u faa'iido badan oo lagu kala saaro borotiinka. Waxay badanaa u baahan tahay hal tallaabo oo keliya si loo kala saaro borotiinka qaarkood si looga nadiifiyo borotiinka qasan ee nadiifka sare leh.

Habkani wuxuu ku salaysan yahay mid gaar ah oo aan ahayn isku xidhka borotiinnada qaarkood ee molecule kale oo loo yaqaan ligand (Ligand).

Mabda'a aasaasiga ah:

borotiinada waxay ku jiraan isku dhafka unugyada ama unugyada, iyo nooc kasta oo unug ah ayaa ka kooban kumanaan borotiinno kala duwan ah. Sidaa darteed, farqiga u dhexeeya borotiinku waa qayb muhiim ah oo ka mid ah biochemistry, kaligiisna ma ahayn. Ama habab diyaarsan ayaa ka saari kara nooc kasta oo borotiin ah borotiinka isku dhafan ee qasan, sidaa darteed habab dhowr ah ayaa inta badan loo isticmaalaa isku darka.