Ločevanje in čiščenje beljakovin se pogosto uporablja v biokemijskih raziskavah in uporabi ter je pomembna operativna veščina. Podjetje SCG Protein Purification System Company-Saipu Instrument je zbralo vsebino surove separacije in fine separacijebeljakovineočiščenje za vse. Tipična evkariontska celica lahko vsebuje na tisoče različnih proteinov, nekateri so zelo bogati, nekateri pa vsebujejo le nekaj kopij. Za proučevanje določenega proteina je potrebno protein najprej očistiti od drugih proteinov in neproteinskih molekul.

Grobo ločevanje

Ko dobimo beljakovinski ekstrakt (včasih pomešan z nukleinskimi kislinami, polisaharidi itd.), izberemo niz ustreznih metod za ločevanje želenegabeljakovineiz drugih nečistoč. Na splošno ta korak ločevanja uporablja metode, kot so izsoljenje, kopičenje izoelektrične točke in frakcioniranje z organskim topilom. Za te metode je značilna preprostost in velika zmogljivost obdelave, ki lahko odstrani številne nečistoče in koncentrira beljakovinsko raztopino. Nekateri beljakovinski izvlečki imajo velike prostornine in niso primerni za koncentracijo s kopičenjem ali izsoljenjem. Za koncentracijo lahko izberete ultrafiltracijo, gelsko filtracijo, zamrzovalno vakuumsko sušenje ali druge metode.

Fino ločevanje

Po grobem frakcioniranju vzorca je prostornina na splošno majhna in večina nečistoč je odstranjenih. Za nadaljnje čiščenje kromatografske metode na splošno vključujejo gelsko filtracijo, ionsko izmenjevalno kromatografijo, adsorpcijsko kromatografijo in afinitetno kromatografijo. Po potrebi lahko kot končni postopek čiščenja izberete tudi elektroforezo, vključno s consko elektroforezo, nastavitvijo izoelektričnih točk itd. Metoda, ki se uporablja za ločevanje ravni podrazdelitve, je na splošno majhna pri načrtovanju, vendar z visoko ločljivostjo.

Kristalizacija je končni proces ločevanja in čiščenja beljakovin. Čeprav proces kristalizacije ne zagotavlja, da mora biti beljakovina enakomerna, se le, če ima določena beljakovina prednost v raztopini, nastane kristal. Sam proces kristalizacije spremlja določena stopnja čiščenja, rekristalizacija pa lahko odstrani majhno količino ponarejenih beljakovin. Ker je denaturiranbeljakovinenikoli ni bilo ugotovljeno med procesom kristalizacije, kristalizacija beljakovin ni le znak čistosti, ampak tudi močno vodilo za ugotavljanje, ali je izdelek v naravnem stanju.