ප්රෝටීන් වෙන් කිරීම සහ පිරිසිදු කිරීම ජෛව රසායන විද්‍යා පර්යේෂණ සහ යෙදුම්වල බහුලව භාවිතා වන අතර එය වැදගත් මෙහෙයුම් කුසලතාවකි. සාමාන්‍ය යුකැරියෝටික් සෛලයක විවිධ ප්‍රෝටීන දහස් ගණනක් අඩංගු විය හැක, සමහරක් ඉතා පොහොසත් වන අතර සමහරක් පිටපත් කිහිපයක් පමණක් අඩංගු වේ. නිශ්චිතව අධ්යයනය කිරීම සඳහාප්රෝටීන්, ප්‍රථමයෙන් අනෙකුත් ප්‍රෝටීන සහ ප්රෝටීන් නොවන අණු වලින් ප්‍රෝටීන පවිත්‍ර කිරීම අවශ්‍ය වේ.
1. ලුණු දැමීමේ ක්‍රමයප්රෝටීන්:
උදාසීන ලුණු ප්රෝටීන් ද්‍රාව්‍යතාව කෙරෙහි සැලකිය යුතු බලපෑමක් ඇති කරයි. සාමාන්‍යයෙන්, අඩු ලුණු සාන්ද්‍රණයක් යටතේ ලුණු සාන්ද්‍රණය වැඩිවීමත් සමඟ ප්රෝටීන් ද්‍රාව්‍යතාව වැඩිවේ. මෙය ලුණු දැමීම ලෙස හැඳින්වේ; ලවණ සාන්ද්‍රණය අඛණ්ඩව වැඩි වන විට ප්රෝටීන් ද්‍රාව්‍යතාව විවිධ මට්ටම්වලට අඩු වී එකින් එක වෙන් වේ. මෙම සංසිද්ධිය ලුණු දැමීම ලෙස හැඳින්වේ.
2. සමවිද්‍යුත් ලක්ෂ්‍ය ගොඩගැසීමේ ක්‍රමය:
ප්‍රෝටීනය ස්ථිතික වන විට අංශු අතර ඇති විද්‍යුත් ස්ථිතික විකර්ෂණය කුඩාම වේ, එබැවින් ද්‍රාව්‍යතාව ද කුඩාම වේ. විවිධ ප්‍රෝටීන වල සම විද්‍යුත් ලක්ෂ්‍ය වෙනස් වේ. සමීකරණ ද්‍රාවණයේ pH අගය ප්‍රෝටීනයක සමවිද්‍යුත් ලක්ෂ්‍යයට ළඟා වීමට භාවිතා කළ හැක, එය සමුච්චය කරන්න, නමුත් මෙම ක්‍රමය කලාතුරකින් පමණක් භාවිතා වන අතර ලුණු දැමීමේ ක්‍රමය සමඟ ඒකාබද්ධ කළ හැකිය.
3. ඩයලිසිස් සහ අල්ට්‍රා ෆිල්ටරේෂන්:
විවිධ අණුක ප්‍රමාණයේ ප්‍රෝටීන වෙන් කිරීම සඳහා ඩයලිසිස් අර්ධ පාරගම්ය පටලයක් භාවිතා කරයි. අල්ට්‍රා පෙරීමේ ක්‍රමය මගින් ජලය සහ අනෙකුත් කුඩා ද්‍රාව්‍ය අණු අර්ධ පාරගම්ය පටලයක් හරහා ගමන් කිරීමට අධි පීඩන හෝ කේන්ද්‍රාපසාරී බලයක් භාවිතා කරයි.ප්රෝටීන්පටලය මත පවතී. විවිධ අණුක බර ප්‍රෝටීන වලට බාධා කිරීම සඳහා ඔබට විවිධ සිදුරු ප්‍රමාණයන් තෝරාගත හැක.
4.ජෙල් පෙරීමේ ක්‍රමය:
Size exclusion chromatography හෝ molecular sieve chromatography ලෙසද හැඳින්වේ, මෙය අණුක ප්‍රමාණය අනුව ප්‍රෝටීන මිශ්‍රණ වෙන් කිරීම සඳහා වඩාත් ප්‍රයෝජනවත් ක්‍රමයකි. තීරුවේ බහුලව භාවිතා වන ඇසුරුම් ද්‍රව්‍ය වන්නේ ග්ලූකෝස් ජෙල් (Sephadex ged) සහ ඇගරෝස් ජෙල් (agarose gel) ය.
5.විද්‍යුත් විච්ඡේදනය:
එකම pH තත්ත්වය යටතේ, විවිධ ප්‍රෝටීන ඒවායේ විවිධ අණුක බර සහ විද්‍යුත් ක්ෂේත්‍රයේ විවිධ ආරෝපණ හේතුවෙන් වෙන් කළ හැක. වාහකයක් ලෙස ඇම්ෆොලයිට් භාවිතා කරන සමාවයවිද්‍යුත් කට්ටල විද්‍යුත් විච්ඡේදනය කෙරෙහි අවධානය යොමු කිරීම වටී. විද්‍යුත් විච්ඡේදනය අතරතුර, ඇම්ෆොලයිට් ධනාත්මක ඉලෙක්ට්‍රෝඩයේ සිට සෘණ ඉලෙක්ට්‍රෝඩයට ක්‍රමයෙන් එකතු වන pH අගයක් සාදයි. යම් ආරෝපණයක් සහිත ප්රෝටීන් එහි පිහිනන විට, එය එකිනෙකා වෙත ළඟා වනු ඇත. විද්‍යුත් ලක්ෂ්‍යයේ pH තත්ත්වය අඛණ්ඩව පවතින අතර විවිධ ප්‍රෝටීන විශ්ලේෂණය කිරීමට සහ සකස් කිරීමට මෙම ක්‍රමය භාවිතා කළ හැක.
6.අයන සන්නිවේදන වර්ණදේහය:
අයන සන්නිෙව්දන කාරකවලට කැටානික සන්නිවේදන කාරක (කාබොක්සිමීතයිල් සෙලියුලෝස්; CM-සෙලියුලෝස් වැනි) සහ ඇනානික් සන්නිවේදන කාරක (ඩයිතයිලමිනොඑතිල් සෙලියුලෝස්) ඇතුළත් වේ. අයන සන්නිවේදන වර්ණදේහ තීරුව හරහා ගමන් කරන විට, අයන සන්නිවේදන කාරකයට ප්‍රතිවිරුද්ධ ආරෝපණය සහිත ප්‍රෝටීනය අයන සන්නිවේදන කාරකය මත අවශෝෂණය කර පසුව adsorbed වේ.ප්රෝටීන්pH අගය හෝ අයනික ශක්තිය වෙනස් කිරීම මගින් ඉවත් කරනු ලැබේ.
7.ඇෆිනිටි ක්‍රොමැටෝග්‍රැෆි:
Affinity chromatography යනු ප්‍රෝටීන වෙන් කිරීම සඳහා අතිශයින්ම ප්‍රයෝජනවත් ක්‍රමයකි. ඉහළ සංශුද්ධතාවයකින් යුත් අපිරිසිදු ප්‍රෝටීන මිශ්‍රණයකින් පිරිසිදු කිරීමට යම් ප්‍රෝටීනයක් වෙන් කිරීමට බොහෝ විට අවශ්‍ය වන්නේ එක් පියවරක් පමණි.
මෙම ක්‍රමය පදනම් වී ඇත්තේ ලිගන්ඩ් (Ligand) ලෙස හඳුන්වන වෙනත් අණුවකට ඇතැම් ප්‍රෝටීන වල සහසංයුජ බන්ධන නිශ්චිතව නොව.
මූලික මූලධර්මය:
ප්‍රෝටීන පටක හෝ සෛලවල අපිරිසිදු මිශ්‍රණයක පවතින අතර සෑම සෛල වර්ගයකම විවිධ ප්‍රෝටීන දහස් ගණනක් අඩංගු වේ. එමනිසා, ප්‍රෝටීන අතර වෙනස ජෛව රසායනයේ වැදගත් අංගයක් වන අතර එය තනිවම නොවේ. එසේත් නැතිනම් සූදානම් කළ ක්රම මාලාවකට අපිරිසිදු මිශ්‍ර ප්‍රෝටීනයකින් ඕනෑම ප්‍රෝටීනයක් ඉවත් කළ හැකි බැවින් ක්රම කිහිපයක් බොහෝ විට ඒකාබද්ධව භාවිතා වේ.
පසු කාලය: නොවැම්බර්-05-2020
