پروٽينن جي علحدگي ۽ صفائي وڏي پيماني تي بايو ڪيمسٽري تحقيق ۽ ايپليڪيشن ۾ استعمال ڪيو ويندو آهي ۽ هڪ اهم عملياتي مهارت آهي. هڪ عام يوڪريوٽڪ سيل هزارين مختلف پروٽينن تي مشتمل ٿي سگهي ٿو، ڪجهه تمام امير آهن ۽ ڪجهه صرف چند نقلن تي مشتمل آهن. ھڪڙي خاص مطالعي لاءپروٽيناهو ضروري آهي ته پهرين پروٽين کي ٻين پروٽينن ۽ غير پروٽينن جي ماليڪيولن کان پاڪ ڪيو وڃي.

1. Salting-آئوٽ جو طريقوپروٽين:

غير جانبدار لوڻ پروٽين جي حل ڪرڻ تي هڪ اهم اثر آهي. عام طور تي، لوڻ جي گھٽتائي جي گھٽتائي جي گھٽتائي سان، پروٽين جي گھٽتائي وڌائي ٿي. اهو سڏيو ويندو آهي salting؛ جڏهن لوڻ جو مقدار وڌندو رهي ٿو، پروٽين جي حلاليت مختلف درجي تائين گهٽجي ويندي آهي ۽ هڪ ٻئي کان پوءِ الڳ ٿي ويندي آهي. هن رجحان کي لوڻ ٻاهر سڏيو ويندو آهي.

2. Isoelectric پوائنٽ اسٽيڪنگ جو طريقو:

ذرڙن جي وچ ۾ اليڪٽرروسٽيٽڪ ريپوليشن سڀ کان ننڍو هوندو آهي جڏهن ته پروٽين جامد هوندو آهي، تنهنڪري حلوليت به ننڍي هوندي آهي. مختلف پروٽينن جا isoelectric points مختلف آهن. ڪنڊيشننگ سلوشن جي پي ايڇ کي پروٽين جي آئسو اليڪٽرڪ پوائنٽ تائين پهچڻ لاءِ استعمال ڪري سگهجي ٿو Make it accumulate، پر اهو طريقو گهٽ ۾ گهٽ اڪيلو استعمال ڪيو ويندو آهي ۽ ان کي سالٽنگ آئوٽ طريقي سان گڏ ڪري سگهجي ٿو.

3. ڊائليسز ۽ الٽرا فلٽريشن:

Dialysis مختلف ماليڪيولر سائزن جي پروٽين کي الڳ ڪرڻ لاءِ هڪ نيم پارميبل جھلي استعمال ڪري ٿو. الٽرا فلٽريشن جو طريقو پاڻي ۽ ٻيا ننڍڙا محلول ماليڪيول ٺاهڻ لاءِ اعليٰ دٻاءُ يا سينٽريفيوگل قوت استعمال ڪري ٿو، جڏهن ته هڪ نيم پارميبل جھلي مان گذري ٿو.پروٽينجھلي تي رهي ٿو. توهان مختلف آلوڪيولر وزنن جي پروٽينن کي روڪڻ لاءِ مختلف پور سائز چونڊي سگهو ٿا.

4. جيل فلٽريشن جو طريقو:

پڻ سڏيو ويندو آهي سائيز خارج ڪرڻ واري ڪروميٽوگرافي يا ماليڪيولر سيو ڪروميٽوگرافي، هي پروٽين جي مرکبن کي ماليڪيولر سائيز جي مطابق الڳ ڪرڻ لاءِ سڀ کان وڌيڪ ڪارائتو طريقو آهي. ڪالمن ۾ عام طور تي استعمال ٿيل پيڪنگ مواد گلوڪوز جيل (Sephadex ged) ۽ agarose gel (agarose gel) آهن.

5. Electrophoresis:

ساڳئي pH حالت ۾، مختلف پروٽينن کي الڳ ڪري سگهجي ٿو انهن جي مختلف ماليڪيولر وزن ۽ برقي ميدان ۾ مختلف چارجن جي ڪري. اهو isoelectric سيٽ electrophoresis تي ڌيان ڏيڻ جي قابل آهي، جيڪو هڪ گاڏين جي طور تي ايمفولائٽ استعمال ڪري ٿو. الیکٹروفورسس جي دوران، ايمفولائيٽ هڪ پي ايڇ گريجوئيٽ ٺاهي ٿو، آهستي آهستي مثبت اليڪٽرروڊ کان منفي اليڪٽرروڊ ۾ شامل ڪيو ويو آهي. جڏهن پروٽين هڪ خاص چارج سان ان ۾ ترندي، اهو هڪ ٻئي تائين پهچي ويندو. اليڪٽرڪ پوائنٽ جي پي ايڇ جي پوزيشن بي ترتيب آهي، ۽ اهو طريقو مختلف پروٽينن جو تجزيو ۽ تيار ڪرڻ لاء استعمال ڪري سگهجي ٿو.

6. آئن ڪميونيڪيشن ڪروميٽوگرافي:

آئن ڪميونيڪيشن ايجنٽن ۾ ڪيشنڪ ڪميونيڪيشن ايجنٽ (جهڙوڪ ڪاربوڪسيميٿيل سيلولوز؛ سي ايم-سيلوز) ۽ انيونڪ ڪميونيڪيشن ايجنٽ (ڊائيٿيلامينوٿيل سيلولوز) شامل آهن. جڏهن آئن ڪميونيڪيشن ڪروميٽوگرافي ڪالمن مان لنگهندي، آئن ڪميونيڪيشن ايجنٽ جي مخالف چارج سان پروٽين کي آئن ڪميونيڪيشن ايجنٽ تي جذب ڪيو ويندو آهي، ۽ پوءِ جذب ڪيو ويندو آهي.پروٽينpH يا ionic طاقت کي تبديل ڪندي خارج ٿيل آهي.

7. لاڳاپو ڪروميٽوگرافي:

Affinity chromatography پروٽين کي الڳ ڪرڻ لاءِ هڪ انتهائي ڪارائتو طريقو آهي. اهو اڪثر ڪري صرف هڪ قدم جي ضرورت آهي ته هڪ خاص پروٽين کي الڳ ڪرڻ لاء هڪ گندي پروٽين جي ميلاپ کان اعلي پاڪائي سان پاڪ ڪيو وڃي.

اهو طريقو مخصوص پروٽينن جي هڪ ٻئي ماليڪيول کي ligand (Ligand) سڏيو وڃي ٿو، خاص بجاءِ ڪوولنٽ بائنڊنگ تي ٻڌل آهي.

بنيادي اصول:

پروٽين ٽشوز يا سيلز ۾ گندا مرکب ۾ موجود آهن، ۽ هر قسم جي سيل ۾ هزارين مختلف پروٽين شامل آهن. تنهن ڪري، پروٽين جي وچ ۾ فرق جيو ڪيمسٽري جو هڪ اهم حصو آهي، ۽ اهو اڪيلو نه ڪيو ويو آهي. يا تيار ڪيل طريقن جو هڪ سيٽ گندي مخلوط پروٽين مان ڪنهن به قسم جي پروٽين کي ختم ڪري سگهي ٿو، تنهنڪري ڪيترائي طريقا اڪثر ميلاپ ۾ استعمال ٿيندا آهن.