Разделение и очистка белков широко используются в биохимических исследованиях и приложениях и являются важным оперативным навыком. Компания SCG Protein Purification System-Saipu Instrument собрала результаты грубого разделения и тонкого разделениябелокочищение для всех. Типичная эукариотическая клетка может содержать тысячи различных белков, некоторые из которых очень богаты, а некоторые содержат всего несколько копий. Чтобы изучить определенный белок, необходимо сначала очистить его от других белков и небелковых молекул.

Грубое разделение

При получении белкового экстракта (иногда смешанного с нуклеиновыми кислотами, полисахаридами и т.п.) подбирается комплекс соответствующих методов выделения искомыхбелокот других примесей. Обычно на этом этапе разделения используются такие методы, как высаливание, накопление изоэлектрической точки и фракционирование органическими растворителями. Эти методы характеризуются простотой и большой производительностью обработки, что позволяет удалить множество примесей и сконцентрировать белковый раствор. Некоторые белковые экстракты имеют большой объем и непригодны для концентрирования путем накопления или высаливания. Вы можете выбрать ультрафильтрацию, гель-фильтрацию, замораживание, вакуумную сушку или другие методы концентрирования.

Тонкое разделение

После грубого фракционирования пробы объем обычно невелик, и большая часть примесей удалена. Для дальнейшей очистки методы хроматографии обычно включают гель-фильтрацию, ионообменную хроматографию, адсорбционную хроматографию и аффинную хроматографию. При необходимости вы также можете выбрать электрофорез, в том числе зональный электрофорез, установку изоэлектрической точки и т. д. в качестве окончательного процесса очистки. Метод, используемый для разделения уровней подразделений, обычно прост в планировании, но имеет высокое разрешение.

Кристаллизация — это заключительный процесс разделения и очистки белка. Хотя процесс кристаллизации не гарантирует однородности белка, это происходит только тогда, когда определенный белок имеет преимущество в растворе, образуя кристалл. Сам процесс кристаллизации сопровождается определенной степенью очистки, а перекристаллизация позволяет удалить небольшое количество фальсифицированного белка. Поскольку денатурированныйбелокникогда не обнаруживалась в процессе кристаллизации, кристаллизация белка является не только признаком чистоты, но и мощным ориентиром для определения того, что продукт находится в своем естественном состоянии.