Separarea și purificarea proteinelor este utilizată pe scară largă în cercetarea și aplicarea biochimiei și este o abilitate operațională importantă. O celulă eucariotă tipică poate conține mii de proteine ​​diferite, unele sunt foarte bogate, iar altele conțin doar câteva copii. Pentru a studia un anumitproteină, este necesar să se purifice mai întâi proteina de alte proteine ​​și molecule non-proteice.

1. Metoda de sărare aproteină:

Sarea neutră are un efect semnificativ asupra solubilității proteinelor. În general, odată cu creșterea concentrației de sare sub concentrație scăzută de sare, solubilitatea proteinei crește. Aceasta se numește sărare; când concentrația de sare continuă să crească, solubilitatea proteinei scade în grade diferite și se separă una după alta. Acest fenomen se numește sărare.

2. Metoda de stivuire a punctului izoelectric:

Repulsia electrostatică dintre particule este cea mai mică atunci când proteina este statică, deci solubilitatea este și cea mai mică. Punctele izoelectrice ale diferitelor proteine ​​sunt diferite. pH-ul soluției de condiționare poate fi folosit pentru a atinge punctul izoelectric al unei proteine. Faceți-o să se acumuleze, dar această metodă este rareori folosită singură și poate fi combinată cu metoda de sărare.

3.Dializa și ultrafiltrare:

Dializa utilizează o membrană semi-permeabilă pentru a separa proteinele de diferite dimensiuni moleculare. Metoda de ultrafiltrare folosește presiune înaltă sau forță centrifugă pentru a face ca apa și alte molecule mici de solut să treacă printr-o membrană semi-permeabilă, în timp ceproteinărămâne pe membrană. Puteți alege diferite dimensiuni ale porilor pentru a intercepta proteine ​​de diferite greutăți moleculare.

4. Metoda de filtrare cu gel:

Denumită și cromatografia de excludere a dimensiunii sau cromatografia cu sită moleculară, aceasta este una dintre cele mai utile metode de separare a amestecurilor de proteine ​​în funcție de dimensiunea moleculară. Materialele de ambalare mai frecvent utilizate în coloană sunt gelul de glucoză (Sephadex ged) și gelul de agaroză (gelul de agaroză).

5. Electroforeza:

În aceeași condiție de pH, diferite proteine ​​pot fi separate datorită greutăților lor moleculare diferite și sarcinilor diferite în câmpul electric. Merită să acordați atenție electroforezei izoelectrice, care utilizează un amfolit ca purtător. În timpul electroforezei, amfolitul formează un gradient de pH adăugat treptat de la electrodul pozitiv la electrodul negativ. Când proteina cu o anumită încărcătură înoată în ea, se va ajunge una la alta. Poziția pH-ului punctului electric este discontinuă, iar această metodă poate fi folosită pentru a analiza și prepara diferite proteine.

6. Cromatografia de comunicare ionică:

agenţii de comunicare ionică includ agenţi de comunicare cationici (cum ar fi carboximetil celuloza; CM-celuloză) şi agenţi de comunicare anionici (dietilaminoetil celuloza). La trecerea prin coloana de cromatografie de comunicare ionică, proteina cu sarcina opusă agentului de comunicare ionică este adsorbită pe agentul de comunicare ionică și apoi cea adsorbită.proteinăse eluează prin modificarea pH-ului sau a tăriei ionice.

7. Cromatografia de afinitate:

Cromatografia de afinitate este o metodă extrem de utilă pentru separarea proteinelor. Adesea necesită doar un singur pas pentru a separa o anumită proteină pentru a fi purificată dintr-un amestec de proteine ​​dezordonat cu puritate ridicată.

Această metodă se bazează pe legarea specifică, mai degrabă decât covalentă, a anumitor proteine ​​de o altă moleculă numită ligand (ligand).

Principiul de baza:

proteinele există într-un amestec dezordonat în țesuturi sau celule și fiecare tip de celulă conține mii de proteine ​​diferite. Prin urmare, distincția dintre proteine ​​este o parte importantă a biochimiei și nu a fost singură. Sau un set de metode gata făcute poate elimina orice fel de proteină dintr-o proteină amestecată dezordonată, așa că mai multe metode sunt adesea folosite în combinație.