A separação e purificação de proteínas é amplamente utilizada em pesquisas e aplicações bioquímicas e é uma habilidade operacional importante. Uma célula eucariótica típica pode conter milhares de proteínas diferentes, algumas são muito ricas e outras contêm apenas algumas cópias. Para estudar um certoproteína, é necessário primeiro purificar a proteína de outras proteínas e moléculas não proteicas.

1. Método de salga deproteína:

O sal neutro tem um efeito significativo na solubilidade das proteínas. Geralmente, com o aumento da concentração de sal sob baixa concentração de sal, a solubilidade da proteína aumenta. Isso é chamado de salga; quando a concentração de sal continua a aumentar, a solubilidade da proteína diminui em vários graus e se separa uma após a outra. Este fenômeno é chamado de salga.

2. Método de empilhamento de ponto isoelétrico:

A repulsão eletrostática entre as partículas é menor quando a proteína está estática, portanto a solubilidade também é menor. Os pontos isoelétricos de várias proteínas são diferentes. O pH da solução condicionadora pode ser usado para atingir o ponto isoelétrico de uma proteína e fazê-la acumular, mas esse método raramente é usado sozinho e pode ser combinado com o método de salga.

3.Diálise e ultrafiltração:

A diálise usa uma membrana semipermeável para separar proteínas de diferentes tamanhos moleculares. O método de ultrafiltração utiliza alta pressão ou força centrífuga para fazer a água e outras pequenas moléculas de soluto passarem através de uma membrana semipermeável, enquanto oproteínapermanece na membrana. Você pode escolher diferentes tamanhos de poros para interceptar proteínas de diferentes pesos moleculares.

Método de filtração 4.Gel:

Também chamada de cromatografia de exclusão de tamanho ou cromatografia de peneira molecular, este é um dos métodos mais úteis para separar misturas de proteínas de acordo com o tamanho molecular. Os materiais de embalagem mais comumente usados ​​na coluna são gel de glicose (Sephadex ged) e gel de agarose (gel de agarose).

5.Eletroforese:

Sob a mesma condição de pH, várias proteínas podem ser separadas devido aos seus diferentes pesos moleculares e diferentes cargas no campo elétrico. Vale atentar para a eletroforese com conjunto isoelétrico, que utiliza um anfólito como carreador. Durante a eletroforese, o anfólito forma um gradiente de pH adicionado gradualmente do eletrodo positivo ao eletrodo negativo. Quando uma proteína com uma certa carga nada nela, elas se alcançam. A posição do pH do ponto elétrico é descontínua e este método pode ser usado para analisar e preparar diversas proteínas.

6. Cromatografia de comunicação iônica:

os agentes de comunicação iônica incluem agentes de comunicação catiônicos (tais como carboximetilcelulose; CM-celulose) e agentes de comunicação aniônicos (dietilaminoetil celulose). Ao passar pela coluna de cromatografia de comunicação iônica, a proteína com carga oposta ao agente de comunicação iônica é adsorvida no agente de comunicação iônica e, em seguida, o adsorvidoproteínaé eluído alterando o pH ou a força iônica.

7. Cromatografia de afinidade:

A cromatografia de afinidade é um método extremamente útil para separar proteínas. Freqüentemente, é necessário apenas uma etapa para separar uma determinada proteína a ser purificada de uma mistura confusa de proteínas com alta pureza.

Este método é baseado na ligação específica, em vez de covalente, de certas proteínas a outra molécula chamada ligante (ligante).

O princípio básico:

as proteínas existem em uma mistura confusa em tecidos ou células, e cada tipo de célula contém milhares de proteínas diferentes. Portanto, a distinção entre proteínas é uma parte importante da bioquímica e não está sozinha. Ou um conjunto de métodos prontos pode remover qualquer tipo de proteína de uma mistura confusa de proteínas, portanto, vários métodos são frequentemente usados ​​em combinação.