ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕਰਨਾ ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧ ਕਰਨਾ ਬਾਇਓਕੈਮਿਸਟਰੀ ਖੋਜ ਅਤੇ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਇਹ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਸੰਚਾਲਨ ਹੁਨਰ ਹੈ। ਇੱਕ ਆਮ ਯੂਕੇਰੀਓਟਿਕ ਸੈੱਲ ਵਿੱਚ ਹਜ਼ਾਰਾਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸ਼ਾਮਲ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਕੁਝ ਬਹੁਤ ਅਮੀਰ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਕੁਝ ਵਿੱਚ ਸਿਰਫ਼ ਕੁਝ ਕਾਪੀਆਂ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ। ਇੱਕ ਖਾਸ ਅਧਿਐਨ ਕਰਨ ਲਈਪ੍ਰੋਟੀਨ, ਪਹਿਲਾਂ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਦੂਜੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਅਤੇ ਗੈਰ-ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਅਣੂਆਂ ਤੋਂ ਸ਼ੁੱਧ ਕਰਨਾ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੈ।

1. ਲੂਣ-ਬਾਹਰ ਦਾ ਢੰਗਪ੍ਰੋਟੀਨ:

ਨਿਰਪੱਖ ਲੂਣ ਦਾ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲਤਾ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਣ ਪ੍ਰਭਾਵ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਘੱਟ ਲੂਣ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੇ ਅਧੀਨ ਲੂਣ ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ ਦੇ ਵਾਧੇ ਦੇ ਨਾਲ, ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲਤਾ ਵਧ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਇਸ ਨੂੰ ਸਲਟਿੰਗ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; ਜਦੋਂ ਲੂਣ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਵਧਦੀ ਰਹਿੰਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲਤਾ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਡਿਗਰੀਆਂ ਤੱਕ ਘੱਟ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਇੱਕ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਇੱਕ ਵੱਖ ਹੋ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਇਸ ਵਰਤਾਰੇ ਨੂੰ ਸਾਲਟਿੰਗ ਆਊਟ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।

2. ਆਈਸੋਇਲੈਕਟ੍ਰਿਕ ਪੁਆਇੰਟ ਸਟੈਕਿੰਗ ਵਿਧੀ:

ਜਦੋਂ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਥਿਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਕਣਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਸਟੈਟਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਸਭ ਤੋਂ ਛੋਟੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਇਸਲਈ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲਤਾ ਵੀ ਸਭ ਤੋਂ ਛੋਟੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪ੍ਰੋਟੀਨਾਂ ਦੇ ਆਈਸੋਇਲੈਕਟ੍ਰਿਕ ਬਿੰਦੂ ਵੱਖਰੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। ਕੰਡੀਸ਼ਨਿੰਗ ਘੋਲ ਦੇ pH ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਆਈਸੋਇਲੈਕਟ੍ਰਿਕ ਬਿੰਦੂ ਤੱਕ ਪਹੁੰਚਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਇਸ ਨੂੰ ਇਕੱਠਾ ਕਰੋ, ਪਰ ਇਹ ਵਿਧੀ ਘੱਟ ਹੀ ਇਕੱਲੇ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ ਸਲਟਿੰਗ-ਆਊਟ ਵਿਧੀ ਨਾਲ ਜੋੜਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।

3. ਡਾਇਲਸਿਸ ਅਤੇ ਅਲਟਰਾਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ:

ਡਾਇਲਸਿਸ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਅਣੂ ਆਕਾਰਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਅਰਧ-ਪਾਰਮੇਬਲ ਝਿੱਲੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਅਲਟਰਾਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਵਿਧੀ ਪਾਣੀ ਅਤੇ ਹੋਰ ਛੋਟੇ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਅਣੂਆਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਅਰਧ-ਪਰਮੇਮੇਬਲ ਝਿੱਲੀ ਵਿੱਚੋਂ ਲੰਘਣ ਲਈ ਉੱਚ ਦਬਾਅ ਜਾਂ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗਲ ਬਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਜਦੋਂ ਕਿਪ੍ਰੋਟੀਨਝਿੱਲੀ 'ਤੇ ਰਹਿੰਦਾ ਹੈ. ਤੁਸੀਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਅਣੂ ਵਜ਼ਨਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪੋਰ ਆਕਾਰ ਚੁਣ ਸਕਦੇ ਹੋ।

4. ਜੈੱਲ ਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਵਿਧੀ:

ਸਾਈਜ਼ ਐਕਸਕਲੂਜ਼ਨ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ ਜਾਂ ਮੋਲੀਕਿਊਲਰ ਸਿਈਵ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ ਵੀ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਇਹ ਅਣੂ ਦੇ ਆਕਾਰ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕਰਨ ਲਈ ਸਭ ਤੋਂ ਲਾਭਦਾਇਕ ਢੰਗਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਹੈ। ਕਾਲਮ ਵਿੱਚ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤੀ ਜਾਣ ਵਾਲੀ ਪੈਕਿੰਗ ਸਮੱਗਰੀ ਗਲੂਕੋਜ਼ ਜੈੱਲ (ਸੇਫੈਡੈਕਸ ਜੈੱਲ) ਅਤੇ ਐਗਰੋਜ਼ ਜੈੱਲ (ਐਗਰੋਸ ਜੈੱਲ) ਹਨ।

5. ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ:

ਉਸੇ pH ਸਥਿਤੀ ਦੇ ਤਹਿਤ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪ੍ਰੋਟੀਨਾਂ ਨੂੰ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਵੱਖੋ-ਵੱਖਰੇ ਅਣੂ ਭਾਰਾਂ ਅਤੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰਿਕ ਫੀਲਡ ਵਿੱਚ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਚਾਰਜਾਂ ਕਾਰਨ ਵੱਖ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਆਈਸੋਇਲੈਕਟ੍ਰਿਕ ਸੈੱਟ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਵੱਲ ਧਿਆਨ ਦੇਣ ਯੋਗ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਇੱਕ ਕੈਰੀਅਰ ਦੇ ਤੌਰ ਤੇ ਇੱਕ ਐਮਫੋਲਾਈਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ. ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਦੇ ਦੌਰਾਨ, ਐਮਫੋਲਾਇਟ ਇੱਕ pH ਗਰੇਡੀਐਂਟ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ ਹੌਲੀ ਹੌਲੀ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਡ ਤੋਂ ਨੈਗੇਟਿਵ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਡ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਜਦੋਂ ਇੱਕ ਖਾਸ ਚਾਰਜ ਵਾਲਾ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਇਸ ਵਿੱਚ ਤੈਰਦਾ ਹੈ, ਇਹ ਇੱਕ ਦੂਜੇ ਤੱਕ ਪਹੁੰਚ ਜਾਵੇਗਾ। ਬਿਜਲਈ ਬਿੰਦੂ ਦੀ pH ਸਥਿਤੀ ਨਿਰੰਤਰ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਹ ਵਿਧੀ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪ੍ਰੋਟੀਨਾਂ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਅਤੇ ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।

6. ਆਇਨ ਸੰਚਾਰ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ:

ਆਇਨ ਸੰਚਾਰ ਏਜੰਟਾਂ ਵਿੱਚ ਕੈਸ਼ਨਿਕ ਸੰਚਾਰ ਏਜੰਟ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਕਾਰਬੋਕਸੀਮਾਈਥਾਈਲ ਸੈਲੂਲੋਜ਼; CM-ਸੈਲੂਲੋਜ਼) ਅਤੇ ਐਨੀਓਨਿਕ ਸੰਚਾਰ ਏਜੰਟ (ਡਾਈਥਾਈਲਾਮਿਨੋਇਥਾਈਲ ਸੈਲੂਲੋਜ਼) ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। ਆਇਨ ਸੰਚਾਰ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ ਕਾਲਮ ਵਿੱਚੋਂ ਲੰਘਦੇ ਸਮੇਂ, ਆਇਨ ਸੰਚਾਰ ਏਜੰਟ ਦੇ ਉਲਟ ਚਾਰਜ ਵਾਲਾ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਆਇਨ ਸੰਚਾਰ ਏਜੰਟ 'ਤੇ ਸੋਖਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਸੋਜ਼ਬਪ੍ਰੋਟੀਨpH ਜਾਂ ਆਇਓਨਿਕ ਤਾਕਤ ਨੂੰ ਬਦਲ ਕੇ ਘਟਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।

7. ਐਫੀਨਿਟੀ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ:

ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕਰਨ ਲਈ ਐਫੀਨਿਟੀ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ ਇੱਕ ਬਹੁਤ ਹੀ ਲਾਭਦਾਇਕ ਤਰੀਕਾ ਹੈ। ਉੱਚ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਵਾਲੇ ਇੱਕ ਗੜਬੜ ਵਾਲੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਿਸ਼ਰਣ ਤੋਂ ਸ਼ੁੱਧ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਖਾਸ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕਰਨ ਲਈ ਅਕਸਰ ਇੱਕ ਕਦਮ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।

ਇਹ ਵਿਧੀ ਲੀਗੈਂਡ (ਲਿਗੈਂਡ) ਕਹੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਕਿਸੇ ਹੋਰ ਅਣੂ ਨਾਲ ਕੁਝ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਸਹਿ-ਸਹਿਯੋਗੀ ਬਾਈਡਿੰਗ ਦੀ ਬਜਾਏ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ 'ਤੇ ਅਧਾਰਤ ਹੈ।

ਮੂਲ ਸਿਧਾਂਤ:

ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਜਾਂ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਗੜਬੜ ਵਾਲੇ ਮਿਸ਼ਰਣ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਹਰੇਕ ਕਿਸਮ ਦੇ ਸੈੱਲ ਵਿੱਚ ਹਜ਼ਾਰਾਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। ਇਸ ਲਈ, ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਵਿਚਕਾਰ ਅੰਤਰ ਬਾਇਓਕੈਮਿਸਟਰੀ ਦਾ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹਿੱਸਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਹ ਇਕੱਲਾ ਨਹੀਂ ਹੈ। ਜਾਂ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦਾ ਇੱਕ ਸਮੂਹ ਇੱਕ ਗੜਬੜ ਵਾਲੇ ਮਿਸ਼ਰਤ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਤੋਂ ਕਿਸੇ ਵੀ ਕਿਸਮ ਦੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਹਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਇਸਲਈ ਕਈ ਢੰਗਾਂ ਨੂੰ ਅਕਸਰ ਸੁਮੇਲ ਵਿੱਚ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।