PCR FAQ 1।
1 ମିଥ୍ୟା ନକାରାତ୍ମକ, କ pl ଣସି ବର୍ଦ୍ଧିତ ବ୍ୟାଣ୍ଡ ଦୃଶ୍ୟମାନ ହୁଏ ନାହିଁ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ମୁଖ୍ୟ ଦିଗଗୁଡ଼ିକ |
ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ପ୍ରସ୍ତୁତି |
② ପ୍ରାଥମିକ ଗୁଣ ଏବଂ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା |
③ ଏନଜାଇମ୍ ଗୁଣ ଏବଂ
④ PCR ଚକ୍ର ଅବସ୍ଥା | ଏହାର କାରଣ ଖୋଜିବା ପାଇଁ, ଉପରୋକ୍ତ ଲିଙ୍କଗୁଡ଼ିକରେ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଏବଂ ଗବେଷଣା ମଧ୍ୟ କରାଯିବା ଉଚିତ୍ |
ଟେମ୍ପଲେଟ୍:
ଟେମ୍ପଲେଟରେ ଅପରିଷ୍କାର ପ୍ରୋଟିନ୍ ଥାଏ |
ଟେମ୍ପଲେଟରେ ଟ୍ୟାକ୍ ଏନଜାଇମ୍ ଇନହିବିଟର ଅଛି |
ଟେମ୍ପଲେଟରେ ଥିବା ପ୍ରୋଟିନ୍ ହଜମ ହୁଏ ନାହିଁ ଏବଂ ଅପସାରିତ ହୁଏ ନାହିଁ, ବିଶେଷତ ch କ୍ରୋମୋଜୋମରେ ଥିବା ହିଷ୍ଟୋନ୍ |
The ଟେମ୍ପଲେଟର ଉତ୍ତୋଳନ ଏବଂ ପ୍ରସ୍ତୁତି ସମୟରେ ଅତ୍ୟଧିକ ନଷ୍ଟ ହୋଇଯାଇଥିଲା, କିମ୍ବା ଫେନୋଲ୍ ନିଶ୍ୱାସରେ ନିଆଯାଇଥିଲା |
ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ରୂପେ ବିଭାଜିତ ନୁହେଁ | ଯେତେବେଳେ ଏନଜାଇମ୍ ଏବଂ ପ୍ରାଇମରର ଗୁଣ ଭଲ, ଯଦି ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବ୍ୟାଣ୍ଡ ଦେଖାଯାଏ ନାହିଁ, ତେବେ ନମୁନାର ହଜମ ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ କିମ୍ବା ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଉତ୍ତୋଳନ ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ କିଛି ଭୁଲ୍ ହେବାର ସମ୍ଭାବନା ଥାଏ | ତେଣୁ, ଏକ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଏବଂ ସ୍ଥିର ହଜମ ସମାଧାନ ପ୍ରସ୍ତୁତ ହେବା ଆବଶ୍ୟକ, ଏବଂ ପଦ୍ଧତି ସ୍ଥିର କରାଯିବା ଉଚିତ ଏବଂ ଇଚ୍ଛାନୁସାରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରାଯିବା ଉଚିତ ନୁହେଁ | । ଏନଜାଇମ ନିଷ୍କ୍ରିୟକରଣ: ନୂତନ ଏନଜାଇମକୁ ବଦଳାଇବା, କିମ୍ବା ଉଭୟ ପୁରୁଣା ଏବଂ ନୂତନ ଏନଜାଇମକୁ ଏକ ସମୟରେ ବ୍ୟବହାର କରିବା ଆବଶ୍ୟକ, ମିଥ୍ୟା ନକାରାତ୍ମକ କ୍ଷତି କିମ୍ବା ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ଏନଜାଇମ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଦ୍ୱାରା ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଏ | ଏହା ମନେ ରଖିବା ଉଚିତ୍ ଯେ ବେଳେବେଳେ ଟ୍ୟାକ୍ ଏନଜାଇମ୍ ଭୁଲିଯାଏ | ପ୍ରାଇମର୍ସ: ପ୍ରାଥମିକ ଗୁଣ, ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତା, ଏବଂ ଦୁଇଟି ପ୍ରାଇମରର ଏକାଗ୍ରତା ସମୃଦ୍ଧ କି ନୁହେଁ PCR ବିଫଳତା କିମ୍ବା ଅସନ୍ତୁଷ୍ଟିକ ବର୍ଦ୍ଧନ ବ୍ୟାଣ୍ଡ ଏବଂ ସହଜ ବିସ୍ତାର ପାଇଁ ସାଧାରଣ କାରଣ | କେତେକ ବ୍ୟାଚ୍ ରେ ପ୍ରାଇମର୍ ସିନ୍ଥେସିସ୍ ଗୁଣରେ ସମସ୍ୟା ଅଛି | ଦୁଇଟି ପ୍ରାଇମର୍ ମଧ୍ୟରୁ ଗୋଟିଏରେ ଅଧିକ ଏକାଗ୍ରତା ଏବଂ ଅନ୍ୟଟିରେ କମ୍ ଏକାଗ୍ରତା ରହିଥାଏ, ଫଳସ୍ୱରୂପ ନିମ୍ନ-ଦକ୍ଷତା ଅସୀମେଟ୍ରିକ୍ ଏମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ |
ପ୍ରତିବାଦ ହେଉଛି:
A ଏକ ଭଲ ପ୍ରାଇମର୍ ସିନ୍ଥେସିସ୍ ୟୁନିଟ୍ ଚୟନ କରନ୍ତୁ |
Prim ପ୍ରାଥମିକଗୁଡିକର ଏକାଗ୍ରତା କେବଳ OD ମୂଲ୍ୟକୁ ଦେଖିବା ଉଚିତ୍ ନୁହେଁ, ବରଂ ଆଗରୋଜ୍ ଜେଲ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ପାଇଁ ପ୍ରାଇମର୍ ଷ୍ଟକ୍ ସମାଧାନ ପ୍ରତି ମଧ୍ୟ ଧ୍ୟାନ ଦେବା ଉଚିତ୍ | ସେଠାରେ ପ୍ରାଇମର୍ ବ୍ୟାଣ୍ଡ ରହିବା ଆବଶ୍ୟକ, ଏବଂ ଦୁଇଟି ପ୍ରାଇମର୍ ବ୍ୟାଣ୍ଡର ଉଜ୍ଜ୍ୱଳତା ପ୍ରାୟ ସମାନ ହେବା ଉଚିତ | ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ଗୋଟିଏ ପ୍ରାଇମରର ଏକ ବ୍ୟାଣ୍ଡ ଅଛି ଏବଂ ଅନ୍ୟ ପ୍ରାଇମରର କ band ଣସି ବ୍ୟାଣ୍ଡ ନାହିଁ | ଷ୍ଟ୍ରିପ୍ ପାଇଁ, PCR ଏହି ସମୟରେ ବିଫଳ ହୋଇପାରେ ଏବଂ ପ୍ରାଥମିକ ସିନ୍ଥେସିସ୍ ୟୁନିଟ୍ ସହିତ ବୁ through ାମଣା ମାଧ୍ୟମରେ ସମାଧାନ ହେବା ଉଚିତ | ଯଦି ଗୋଟିଏ ପ୍ରାଇମରର ଉଚ୍ଚ ଉଜ୍ଜ୍ୱଳତା ଏବଂ ଅନ୍ୟଟିରେ କମ୍ ଉଜ୍ଜ୍ୱଳତା ଥାଏ, ତେବେ ପ୍ରାଇମର୍ ଗୁଡିକୁ ହ୍ରାସ କରିବା ସମୟରେ ଏକାଗ୍ରତାକୁ ସନ୍ତୁଳିତ କରନ୍ତୁ |
ବାରମ୍ବାର ଫ୍ରିଜ୍ ଏବଂ ଥୱିଙ୍ଗ୍ କିମ୍ବା ରେଫ୍ରିଜରେଟରରେ ଦୀର୍ଘକାଳୀନ ସଂରକ୍ଷଣକୁ ରୋକିବା ପାଇଁ ପ୍ରାଇମର୍ ଗୁଡିକ ଅଧିକ ଏକାଗ୍ରତା ଏବଂ ଅଳ୍ପ ପରିମାଣରେ ଗଚ୍ଛିତ ହେବା ଉଚିତ, ଯାହା ପ୍ରାଇମରଗୁଡିକର ଅବନତି ଏବଂ ଅବନତି ଘଟାଇପାରେ |
Prim ପ୍ରାଇମର୍ ଡିଜାଇନ୍ ଅଯ able କ୍ତିକ ଅଟେ, ଯେପରିକି ପ୍ରାଇମର୍ ଲମ୍ବ ଯଥେଷ୍ଟ ନୁହେଁ, ପ୍ରାଇମର୍ ମଧ୍ୟରେ ଡାଇମର୍ ଗଠନ ହୁଏ | Mg2 + ଏକାଗ୍ରତା: PCR ବିସ୍ତାର ଦକ୍ଷତା ଉପରେ Mg2 + ଆୟନର ଏକାଗ୍ରତା ବହୁତ ପ୍ରଭାବ ପକାଇଥାଏ | ଯଦି ଏକାଗ୍ରତା ଅତ୍ୟଧିକ ଅଧିକ, ଏହା PCR ବିସ୍ତାରର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତାକୁ ହ୍ରାସ କରିପାରେ | ଯଦି ଏକାଗ୍ରତା ଅତ୍ୟଧିକ କମ୍, ଏହା PCR ଆମ୍ଲିଫିକେସନ୍ ଅମଳ ଉପରେ ପ୍ରଭାବ ପକାଇବ ଏବଂ ବ୍ୟାଣ୍ଡ ଏମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବିନା PCR ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବିଫଳ ହେବ | ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଭଲ୍ୟୁମରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ: ସାଧାରଣତ PCR PCR ବିସ୍ତାର ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ଭଲ୍ୟୁମ୍ ହେଉଛି 20ul, 30ul, ଏବଂ 50ul | କିମ୍ବା 100ul, PCR ବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ କେଉଁ ଭଲ୍ୟୁମ୍ ବ୍ୟବହାର କରାଯିବା ଉଚିତ ତାହା ବ scientific ଜ୍ଞାନିକ ଅନୁସନ୍ଧାନ ଏବଂ କ୍ଲିନିକାଲ୍ ପରୀକ୍ଷଣର ବିଭିନ୍ନ ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟ ଅନୁଯାୟୀ ସେଟ୍ ହୋଇଛି | ଏକ ଛୋଟ ଭଲ୍ୟୁମ୍ ତିଆରି କରିବା ପରେ, ଯେପରିକି 20ul, ଏବଂ ତାପରେ ଏକ ବଡ଼ ଭଲ୍ୟୁମ୍ ତିଆରି କରିବା ପରେ, ଆପଣ ନିଶ୍ଚିତ ଭାବରେ ସର୍ତ୍ତଗୁଡିକ ଅନୁସରଣ କରିବେ, ନଚେତ୍ ଏହା ସହଜରେ ବିଫଳ ହେବ | ଶାରୀରିକ କାରଣ: PCR ବିସ୍ତାର ପାଇଁ ଡେନାଟୁରେସନ୍ ଅତ୍ୟନ୍ତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ | ଯଦି ଡେନାଟେରେସନ୍ ତାପମାତ୍ରା କମ୍ ଏବଂ ଡେନାଟ୍ରେସନ୍ ସମୟ ସ୍ୱଳ୍ପ, ମିଥ୍ୟା ନକାରାତ୍ମକ ହେବାର ସମ୍ଭାବନା ଅଧିକ | ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ଅତ୍ୟଧିକ କମ୍, ଯାହା ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବର୍ଦ୍ଧନ ଦକ୍ଷତା ହ୍ରାସ କରିପାରେ | ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ବହୁତ ଅଧିକ | ଟେମ୍ପଲେଟଗୁଡିକ ପାଇଁ ପ୍ରାଇମରଗୁଡିକର ବନ୍ଧନକୁ ଅଧିକ ପ୍ରଭାବିତ କରେ ଏବଂ PCR ବିସ୍ତାର କ୍ଷମତା ହ୍ରାସ କରେ | ବେଳେବେଳେ ଏମ୍ପ୍ଲିଫାୟର୍ କିମ୍ବା ଜଳ-ଦ୍ରବଣୀୟ ହାଣ୍ଡିରେ ଡେନାଟ୍ରେସନ୍, ଆନ୍ଲିଙ୍ଗ୍ ଏବଂ ବିସ୍ତାର ତାପମାତ୍ରା ଯାଞ୍ଚ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ମାନକ ଥର୍ମୋମିଟର ବ୍ୟବହାର କରିବା ଆବଶ୍ୟକ | PCR ବିଫଳତାର ଏହା ମଧ୍ୟ ଅନ୍ୟତମ | ଟାର୍ଗେଟ୍ କ୍ରମର ପରିବର୍ତ୍ତନ: ଯଦି ଟାର୍ଗେଟ୍ କ୍ରମ ପରିବର୍ତ୍ତନ ହୋଇଛି କିମ୍ବା ଡିଲିଟ୍ ହୋଇଛି, ଯାହା ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ସହିତ ପ୍ରାଇମରର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବନ୍ଧନକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିଥାଏ, କିମ୍ବା ଟାର୍ଗେଟ୍ କ୍ରମର ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ସେଗମେଣ୍ଟ୍ ବିଲୋପ ହେତୁ ପ୍ରାଇମର୍ ଏବଂ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ କ୍ରମ ହରାଇଥାଏ | ସଫଳ ହେବ ନାହିଁ |
2. ମିଥ୍ୟା ପଜିଟିଭ୍ PCR ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବ୍ୟାଣ୍ଡ ଯାହା ଦୃଶ୍ୟମାନ ହୁଏ, ଟାର୍ଗେଟ୍ କ୍ରମ ବ୍ୟାଣ୍ଡ ସହିତ ସମାନ ଅଟେ, ଏବଂ ବେଳେବେଳେ ବ୍ୟାଣ୍ଡ ଅଧିକ ଶୃଙ୍ଖଳିତ ଏବଂ ଉଜ୍ଜ୍ୱଳ ହୋଇଥାଏ | ଅନୁପଯୁକ୍ତ ପ୍ରାଇମର୍ ଡିଜାଇନ୍: ମନୋନୀତ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ କ୍ରମରେ ଅଣ-ଟାର୍ଗେଟ୍ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ କ୍ରମ ସହିତ ହୋମୋଲୋଜି ଅଛି, ତେଣୁ PCR ବିସ୍ତାରଣ କାର୍ଯ୍ୟ କରିବାବେଳେ, ବର୍ଦ୍ଧିତ PCR ଉତ୍ପାଦ ଏକ ଲକ୍ଷ୍ୟହୀନ କ୍ରମ | ଯଦି ଟାର୍ଗେଟ୍ କ୍ରମ ବହୁତ ଛୋଟ କିମ୍ବା ପ୍ରାଇମର୍ ବହୁତ ଛୋଟ, ମିଥ୍ୟା ପଜିଟିଭ୍ ସହଜରେ ହୋଇପାରେ | ପ୍ରାଥମିକଗୁଡିକ ପୁନ es ଡିଜାଇନ୍ ହେବା ଆବଶ୍ୟକ | ଟାର୍ଗେଟ୍ କ୍ରମ କିମ୍ବା ବର୍ଦ୍ଧିତ ଦ୍ରବ୍ୟର କ୍ରସ୍-ପ୍ରଦୂଷଣ: ଏହି ପ୍ରଦୂଷଣର ଦୁଇଟି କାରଣ ଅଛି: ପ୍ରଥମେ, ସମଗ୍ର ଜିନୋମ୍ କିମ୍ବା ବଡ଼ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର କ୍ରସ୍-ପ୍ରଦୂଷଣ, ଯାହା ମିଥ୍ୟା ପଜିଟିଭ୍ ଆଡକୁ ଗତି କରେ | ନିମ୍ନଲିଖିତ ପଦ୍ଧତି ଦ୍ This ାରା ଏହି ମିଥ୍ୟା ପଜିଟିଭ୍ ସମାଧାନ ହୋଇପାରିବ: ଟାର୍ଗେଟ୍ କ୍ରମକୁ ନମୁନା ବନ୍ଧୁକରେ ଚୋବାଇବା କିମ୍ବା ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବରୁ ବାହାରକୁ ନଯିବା ପାଇଁ କାର୍ଯ୍ୟ କରିବା ସମୟରେ ସତର୍କ ରୁହନ୍ତୁ | ଏନଜାଇମ୍ ଏବଂ ପଦାର୍ଥ ବ୍ୟତୀତ ଯାହା ଉଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରାକୁ ସହ୍ୟ କରିପାରିବ ନାହିଁ, ସମସ୍ତ ରେଜେଣ୍ଟସ୍ କିମ୍ବା ଯନ୍ତ୍ରପାତିଗୁଡିକ ଉଚ୍ଚ ଚାପ ଦ୍ୱାରା ନିର୍ଗତ ହେବା ଉଚିତ | ସମସ୍ତ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ ଏବଂ ନମୁନା ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ୍ ପାଇପେଟ୍ ଟିପ୍ସ ଥରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯିବା ଉଚିତ | ଯଦି ଆବଶ୍ୟକ ହୁଏ, ଉପସ୍ଥିତ ଥିବା ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ନଷ୍ଟ କରିବା ପାଇଁ ନମୁନା ଯୋଡିବା ପୂର୍ବରୁ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଟ୍ୟୁବ୍ ଏବଂ ରେଜେଣ୍ଟଗୁଡିକ ଅତିବାଇଗଣି ରଙ୍ଗର ଆଲୋକ ସହିତ ବିକିରଣ କରାଯାଏ | ଦ୍ୱିତୀୟଟି ହେଉଛି ବାୟୁରେ ଥିବା ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ର ଛୋଟ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଦୂଷିତ | ଏହି ଛୋଟ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ଲକ୍ଷ୍ୟ କ୍ରମଠାରୁ ଛୋଟ, କିନ୍ତୁ କିଛି ହୋମୋଲୋଜି ଅଛି | ସେଗୁଡିକ ପରସ୍ପରକୁ ବିଭକ୍ତ କରାଯାଇପାରେ, ଏବଂ ପ୍ରାଇମର୍ ସହିତ ସଂପନ୍ନ ହେବା ପରେ, PCR ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକ ବୃଦ୍ଧି କରାଯାଇପାରିବ, ଫଳସ୍ୱରୂପ ମିଥ୍ୟା ପଜିଟିଭ୍ ହୋଇପାରେ, ଯାହା ନଷ୍ଟ ହୋଇଥିବା PCR ପଦ୍ଧତି ଦ୍ୱାରା ହ୍ରାସ କିମ୍ବା ବିଲୋପ ହୋଇପାରେ |
3. କ specific ଣସି ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବ୍ୟାଣ୍ଡ ଦୃଶ୍ୟମାନ ହୁଏ ନାହିଁ PCR ବିସ୍ତାର ପରେ ଦେଖାଯାଉଥିବା ବ୍ୟାଣ୍ଡଗୁଡିକ ଆଶା କରାଯାଉଥିବା ଆକାର ସହିତ ଅସଙ୍ଗତ, ବଡ଼ କିମ୍ବା ଛୋଟ, କିମ୍ବା ଉଭୟ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବ୍ୟାଣ୍ଡ ଏବଂ ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବ୍ୟାଣ୍ଡ ଏକ ସମୟରେ ଦେଖାଯାଏ | ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବ୍ୟାଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଦୃଶ୍ୟମାନ ହେବାର କାରଣଗୁଡ଼ିକ ହେଉଛି: ପ୍ରଥମତ the, ପ୍ରାଇମର୍ଗୁଡ଼ିକ ଟାର୍ଗେଟ୍ କ୍ରମରେ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ସଂପନ୍ନ ନୁହେଁ, କିମ୍ବା ଡାଇମର୍ ଗଠନ ପାଇଁ ପ୍ରାଇମର୍ସ ଏଗ୍ରିମେଣ୍ଟ୍ | ଦ୍ୱିତୀୟ କାରଣ ହେଉଛି Mg2 + ଆୟନର ଏକାଗ୍ରତା ଅତ୍ୟଧିକ, ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ବହୁତ କମ୍, ଏବଂ PCR ଚକ୍ର ସଂଖ୍ୟା ବହୁତ ଅଧିକ | ଦ୍ୱିତୀୟ କାରଣ ହେଉଛି ଏନଜାଇମର ଗୁଣ ଏବଂ ପରିମାଣ | କେତେକ ଉତ୍ସରୁ ଏନଜାଇମ୍ ପ୍ରାୟତ non ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବ୍ୟାଣ୍ଡରେ ପ୍ରବୃତ୍ତ ହୁଏ କିନ୍ତୁ ଅନ୍ୟ ଉତ୍ସରୁ ଏନଜାଇମ୍ ହୁଏ ନାହିଁ | ଅତ୍ୟଧିକ ପରିମାଣର ଏନଜାଇମ୍ ବେଳେବେଳେ ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବିସ୍ତାରକୁ ନେଇପାରେ | କାଉଣ୍ଟର ମାପଗୁଡିକ ଅନ୍ତର୍ଭୂକ୍ତ କରେ: ଆବଶ୍ୟକ ହେଲେ ପ୍ରାଇମର୍ଗୁଡ଼ିକୁ ପୁନ es ଡିଜାଇନ୍ କରନ୍ତୁ | ଏନଜାଇମର ପରିମାଣ ହ୍ରାସ କରନ୍ତୁ କିମ୍ବା ଏହାକୁ ଅନ୍ୟ ଉତ୍ସ ସହିତ ବଦଳାନ୍ତୁ | ପ୍ରାଥମିକ ପରିମାଣ ହ୍ରାସ କର, ଟେମ୍ପଲେଟର ପରିମାଣକୁ ଉପଯୁକ୍ତ ଭାବରେ ବୃଦ୍ଧି କର ଏବଂ ଚକ୍ର ସଂଖ୍ୟା ହ୍ରାସ କର | ଉପଯୁକ୍ତ ଭାବରେ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ବ or ାନ୍ତୁ କିମ୍ବା ଦୁଇ-ତାପମାତ୍ରା ପଏଣ୍ଟ୍ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ (° 93 ° C ରେ ଡେନାଟ୍ରେସନ୍, ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ଏବଂ ° 65 ° C ବିସ୍ତାର) |
4. ଫ୍ଲେକି ଡ୍ରାଗ୍ କିମ୍ବା ସ୍ମେୟାର୍ PCR ଆମ୍ଲିଫିକେସନ୍ ବେଳେବେଳେ ସ୍ମେୟାର୍ ବ୍ୟାଣ୍ଡ, ସିଟ୍ ପରି ବ୍ୟାଣ୍ଡ କିମ୍ବା କାର୍ପେଟ୍ ପରି ବ୍ୟାଣ୍ଡ ପରି ଦେଖାଯାଏ | ଏହାର କାରଣଗୁଡିକ ଅତ୍ୟଧିକ ଏନଜାଇମ୍ କିମ୍ବା ଖରାପ ଗୁଣର ଏନଜାଇମ୍, ଅତ୍ୟଧିକ ଉଚ୍ଚ DNTP ଏକାଗ୍ରତା, ଅତ୍ୟଧିକ Mg2 + ଏକାଗ୍ରତା, ଅତ୍ୟଧିକ କମ୍ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ଏବଂ ଅତ୍ୟଧିକ ଚକ୍ର ଦ୍ୱାରା ହୋଇଥାଏ | ପ୍ରତିକୂଳ ପଦକ୍ଷେପଗୁଡିକ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ: en ଏନଜାଇମର ପରିମାଣକୁ ହ୍ରାସ କର, କିମ୍ବା ଏନଜାଇମକୁ ଅନ୍ୟ ଉତ୍ସ ସହିତ ବଦଳାନ୍ତୁ | DNTP ର ଏକାଗ୍ରତା ହ୍ରାସ କର | ଉପଯୁକ୍ତ ଭାବରେ Mg2 + ଏକାଗ୍ରତା ହ୍ରାସ କରନ୍ତୁ | ଟେମ୍ପଲେଟର ପରିମାଣ ବ and ାନ୍ତୁ ଏବଂ ଚକ୍ର ସଂଖ୍ୟା ହ୍ରାସ କରନ୍ତୁ |
