Separasjon og rensing av proteiner er mye brukt i biokjemiforskning og anvendelse og er en viktig operasjonell ferdighet. En typisk eukaryot celle kan inneholde tusenvis av forskjellige proteiner, noen er svært rike og noen inneholder bare noen få kopier. For å studere en vissprotein, er det nødvendig å først rense proteinet fra andre proteiner og ikke-proteinmolekyler.

1. Utsaltingsmetode avprotein:

Nøytralt salt har en betydelig effekt på løseligheten av protein. Generelt, med økning av saltkonsentrasjon under lav saltkonsentrasjon, øker løseligheten av protein. Dette kalles salting; når saltkonsentrasjonen fortsetter å øke, avtar proteinets løselighet i varierende grad og skilles ut etter hverandre. Dette fenomenet kalles utsalting.

2. Isoelektrisk punktstablingsmetode:

Den elektrostatiske frastøtingen mellom partikler er minst når proteinet er statisk, så løseligheten er også den minste. De isoelektriske punktene til forskjellige proteiner er forskjellige. pH-verdien til kondisjoneringsløsningen kan brukes til å nå det isoelektriske punktet til et protein Få det til å akkumulere, men denne metoden brukes sjelden alene og kan kombineres med utsaltingsmetoden.

3. Dialyse og ultrafiltrering:

Dialyse bruker en semipermeabel membran for å skille proteiner av forskjellige molekylstørrelser. Ultrafiltreringsmetoden bruker høyt trykk eller sentrifugalkraft for å få vann og andre små oppløste molekyler til å passere gjennom en semipermeabel membran, mensproteinforblir på membranen. Du kan velge forskjellige porestørrelser for å fange opp proteiner med forskjellig molekylvekt.

4. Gelfiltreringsmetode:

Også kalt størrelseseksklusjonskromatografi eller molekylsiktkromatografi, dette er en av de mest nyttige metodene for å separere proteinblandinger i henhold til molekylstørrelse. De mest brukte pakkematerialene i kolonnen er glukosegel (Sephadex ged) og agarosegel (agarosegel).

5. Elektroforese:

Under samme pH-tilstand kan forskjellige proteiner separeres på grunn av deres forskjellige molekylvekter og forskjellige ladninger i det elektriske feltet. Det er verdt å ta hensyn til isoelektrisk sett elektroforese, som bruker en amfolytt som bærer. Under elektroforese danner amfolytten en pH-gradient som gradvis legges til fra den positive elektroden til den negative elektroden. Når proteinet med en viss ladning svømmer i det, vil det nå hverandre. pH-posisjonen til det elektriske punktet er diskontinuerlig, og denne metoden kan brukes til å analysere og tilberede ulike proteiner.

6. Ionekommunikasjonskromatografi:

ionkommunikasjonsmidler inkluderer kationiske kommunikasjonsmidler (som karboksymetylcellulose; CM-cellulose) og anioniske kommunikasjonsmidler (dietylaminoetylcellulose). Når det passerer gjennom ionekommunikasjonskromatografikolonnen, adsorberes proteinet med motsatt ladning til ionekommunikasjonsmidlet på ionekommunikasjonsmidlet, og deretter det adsorberteproteinelueres ved å endre pH eller ionestyrke.

7. Affinitetskromatografi:

Affinitetskromatografi er en ekstremt nyttig metode for å separere proteiner. Det krever ofte bare ett trinn for å skille et bestemt protein som skal renses fra en rotete proteinblanding med høy renhet.

Denne metoden er basert på spesifikk snarere enn kovalent binding av visse proteiner til et annet molekyl kalt en ligand (Ligand).

Grunnprinsippet:

proteiner finnes i en rotete blanding i vev eller celler, og hver type celle inneholder tusenvis av forskjellige proteiner. Derfor er skillet mellom proteiner en viktig del av biokjemien, og det har ikke vært alene. Eller et sett med ferdige metoder kan fjerne enhver form for protein fra et rotete blandet protein, så flere metoder brukes ofte i kombinasjon.