De scheiding en zuivering van eiwitten wordt veel gebruikt in biochemisch onderzoek en toepassing en is een belangrijke operationele vaardigheid. Een typische eukaryotische cel kan duizenden verschillende eiwitten bevatten, sommige zijn erg rijk en sommige bevatten slechts een paar kopieën. Om een ​​bepaald ding te bestudereneiwitis het noodzakelijk om het eiwit eerst te zuiveren van andere eiwitten en niet-eiwitmoleculen.

1. Uitzoutingsmethode vaneiwit:

Neutraal zout heeft een significant effect op de oplosbaarheid van eiwitten. Over het algemeen neemt met de toename van de zoutconcentratie bij een lage zoutconcentratie de oplosbaarheid van eiwitten toe. Dit wordt zouten genoemd; wanneer de zoutconcentratie blijft stijgen, neemt de oplosbaarheid van eiwitten in verschillende mate af en scheidt zich de een na de ander af. Dit fenomeen wordt uitzouten genoemd.

2. Iso-elektrische puntstapelmethode:

De elektrostatische afstoting tussen deeltjes is het kleinst als het eiwit statisch is, dus de oplosbaarheid is ook het kleinst. De iso-elektrische punten van verschillende eiwitten zijn verschillend. De pH van de conditioneringsoplossing kan worden gebruikt om het iso-elektrische punt van een eiwit te bereiken. Laat het zich ophopen, maar deze methode wordt zelden alleen gebruikt en kan worden gecombineerd met de uitzoutingsmethode.

3.Dialyse en ultrafiltratie:

Dialyse maakt gebruik van een semi-permeabel membraan om eiwitten van verschillende moleculaire groottes te scheiden. De ultrafiltratiemethode maakt gebruik van hoge druk of middelpuntvliedende kracht om water en andere kleine opgeloste moleculen door een semi-permeabel membraan te laten gaan, terwijl deeiwitblijft op het membraan zitten. U kunt verschillende poriegroottes kiezen om eiwitten met verschillende molecuulgewichten te onderscheppen.

4.Gelfiltratiemethode:

Ook wel grootte-uitsluitingschromatografie of moleculaire zeefchromatografie genoemd, dit is een van de meest bruikbare methoden voor het scheiden van eiwitmengsels op basis van moleculaire grootte. De meest gebruikte pakkingmaterialen in de kolom zijn glucosegel (Sephadex ged) en agarosegel (agarosegel).

5. Elektroforese:

Onder dezelfde pH-omstandigheden kunnen verschillende eiwitten worden gescheiden vanwege hun verschillende molecuulgewichten en verschillende ladingen in het elektrische veld. Het is de moeite waard aandacht te besteden aan iso-elektrische set-elektroforese, waarbij een amfolyt als drager wordt gebruikt. Tijdens elektroforese vormt de amfolyt een pH-gradiënt die geleidelijk wordt toegevoegd van de positieve elektrode naar de negatieve elektrode. Wanneer de eiwitten met een bepaalde lading erin zwemmen, zullen deze elkaar bereiken. De pH-positie van het elektrische punt is discontinu en deze methode kan worden gebruikt om verschillende eiwitten te analyseren en te bereiden.

6. Ionencommunicatiechromatografie:

ionencommunicatiemiddelen omvatten kationische communicatiemiddelen (zoals carboxymethylcellulose; CM-cellulose) en anionische communicatiemiddelen (diethylaminoethylcellulose). Wanneer het door de ionencommunicatiechromatografiekolom gaat, wordt het eiwit met de tegenovergestelde lading van het ionencommunicatiemiddel geadsorbeerd op het ionencommunicatiemiddel, en vervolgens wordt het geadsorbeerdeeiwitwordt geëlueerd door de pH of ionsterkte te veranderen.

7. Affiniteitschromatografie:

Affiniteitschromatografie is een uiterst nuttige methode voor het scheiden van eiwitten. Vaak is er maar één stap nodig om een ​​bepaald te zuiveren eiwit te scheiden van een rommelig eiwitmengsel met hoge zuiverheid.

Deze methode is gebaseerd op de specifieke in plaats van covalente binding van bepaalde eiwitten aan een ander molecuul dat een ligand (Ligand) wordt genoemd.

Het basisprincipe:

eiwitten bestaan ​​in een rommelig mengsel in weefsels of cellen, en elk type cel bevat duizenden verschillende eiwitten. Daarom is het onderscheid tussen eiwitten een belangrijk onderdeel van de biochemie, en dit is niet het enige onderscheid. Of een reeks kant-en-klare methoden kan elk soort eiwit uit een rommelig gemengd eiwit verwijderen, dus worden er vaak verschillende methoden door elkaar gebruikt.