विधिहरूप्रोटीन शुद्धीकरण:

प्रोटिन शुद्धीकरण, प्रोटिनको विभाजन र शुद्धिकरणको विधि, प्रोटिन मूल कोशिका वा तन्तुहरूबाट विघटित अवस्थामा निस्कन्छ र जैविक गतिविधिलाई हानि नगरी मौलिक प्राकृतिक अवस्थामा रहन्छ। यस कारणका लागि, सामग्रीले जनावर र वसाको तन्तुहरू हटाउनु पर्छ, बीउ सामग्रीले ट्यानिन जस्ता पदार्थहरूबाट बीउ कोटको दूषिततालाई पनि हटाउनुपर्दछ, र तेलको बीउले कम उमालेको जैविक विलायक प्रयोग गर्नुपर्छ।

1. प्रोटीन शुद्धिकरणको विधि, आकार र विभिन्न विभाजन विश्लेषण विधिहरू: डायलाइसिस र अल्ट्राफिल्ट्रेसनले यी प्रोटीनहरूलाई अर्ध-पारगम्य झिल्लीबाट पार गर्न नसक्ने अणुहरूको प्रकृतिबाट पार गर्न प्रयोग गर्दछ; घनत्व ग्रेडियन्ट सेन्ट्रीफ्यूगेशन मध्यममा प्रोटीनको गुणस्तर र घनत्वले कणहरूमा बढी प्रभाव पार्छ। बसोबास गति छिटो छ; जेल निस्पंदन एक प्रकारको स्तम्भ क्रोमेटोग्राफी हो।

2. प्रयोगमा घुलनशीलता भिन्नताको पृथक्करण: प्रोटिन अणुहरूको शुद्ध चार्ज शून्य आइसोइलेक्ट्रिक बिन्दुमा भएकोले इलेक्ट्रो-अवक्षेपण, अणुहरू बीचको इलेक्ट्रोस्ट्याटिक प्रतिकर्षण घटाउने, समग्र गर्न सजिलो, र न्यूनतम घुलनशीलता; नुन घोलको साथ प्रयोग गरिएको नुन घोलले प्रोटिनको घुलनशीलता बढाउँछ वा घटाउँछ।

3. चार्ज अलग र विभिन्न विधिहरू द्वारा विश्लेषण गरिएको छ, मुख्य सामग्रीहरू इलेक्ट्रोफोरेसिस र आयन एक्सचेंज क्रोमेटोग्राफी समावेश गर्दछ।

४. विधिहरूप्रोटीन शुद्धीकरणप्रोटीनको चयनात्मक सोखन र विभाजनले कण सोखनको बल प्रयोग गर्दछ।

5. एफिनिटी क्रोमैटोग्राफी लिगान्ड्स को विभाजन मा आधारित छ। यो जैविक विशेषताले प्रोटीन अणुहरूलाई लिगान्ड भनिने अर्को अणुलाई सहसंयोजक रूपमा बाँध्न अनुमति दिन्छ।

6. प्रोटिन शुद्धिकरणको विधि: कम-तापमानको जैविक विलायक वर्षा विधि: धेरैजसो प्रोटिनहरूको घुलनशीलता र वर्षा कम गर्नका लागि पानीमा मिसाइबल हुने जैविक विलायकहरू, जस्तै मिथानोल, इथानोल प्रयोग गर्नुहोस्। यो विधि रिजोल्युसन नुनिकरण भन्दा उच्च छ, तर प्रोटिनले बढी डिनेचर गर्दछ जब सजिलो हुन्छ, यो कम तापक्रममा गर्नुपर्छ।

कसरी शुद्ध गर्नेप्रोटीन शुद्धीकरण:

प्रोटिनलाई कसरी शुद्ध गर्ने, प्रोटीन एक ठूलो अणु हो, र विभिन्न आणविक आकारको एल्बुमिन, प्रोटिन र साना अणु सामग्रीहरू छुट्याउनका लागि केही सरल तरिकाहरू छन्, र प्रोटीन मिश्रणलाई पनि छुट्याइन्छ। विभिन्न आणविक आकारका प्रोटीनहरू अलग गर्ने मुख्य विधिहरू डायलिसिस, अल्ट्राफिल्ट्रेशन, जेल फिल्टरेशन, र केन्द्रापसारक विभाजन हुन्। डायलिसिस र अल्ट्राफिल्ट्रेशन सामान्यतया प्रोटीन विभाजन विधिहरूमा प्रयोग गरिन्छ। अलग गर्न को लागी डायलिसिस मिश्रण एक अर्ध पारगम्य झिल्ली बनेको डायलिसिस झोला मा राखिएको छ, र त्यसपछि अलग गर्न को लागी डायलिसिस समाधान मा डुबाइन्छ। अल्ट्राफिल्ट्रेसन भनेको अर्ध-पारगम्य झिल्लीमा केन्द्रापसारक बल वा दबाब प्रयोग गरेर पानी र अन्य साना अणुहरू पार गर्ने प्रक्रिया हो र अर्ध-पारगम्य झिल्लीमा प्रोटिनहरू फ्याप्ने प्रक्रिया हो। यी दुई विधिहरूलाई प्रोटिन-आधारित म्याक्रोमोलिक्युलहरू र अकार्बनिक नुन-आधारित साना अणुहरूबाट अलग गर्न सकिन्छ। तिनीहरू प्रायः नुन निकालिन्छन्, नुन विघटन विधिसँग संयोजनमा प्रयोग गरिन्छ, वा अजैविक नुन समाधानहरू प्रयोग गरेर नुन निकालेपछि यी दुई विधिहरू बाहिर निकाल्नको लागि पेश गर्न सकिन्छ।

1. नुनको मात्रा बढाएर प्रोटिनलाई कसरी शुद्ध गर्ने: नुन निकाल्ने विधिको आधार भनेको पातलो नुन घोलमा प्रोटिनको घुलनशीलता नुनको सांद्रता बढेसँगै बढ्छ, तर जब नुनको मात्रा निश्चित मानसम्म पुग्छ, जल गतिविधि बढाइनेछ। घटाउनुहोस्, जसले फलस्वरूप केही प्रोटीनहरूलाई आणविक संरचना सतह मार्फत चार्जहरू उत्पन्न गर्नको लागि बिस्तारै तटस्थ बनाउन सक्छ, र हाइड्रेशन झिल्ली बिस्तारै नष्ट हुन्छ, जसले अन्ततः सम्बन्धित प्रोटीनहरू र अणुहरूलाई जम्मा गर्न र विभिन्न समाधानहरूबाट अवक्षेपण गर्न सक्छ।

2. जैविक विलायक वर्षा विधि: जैविक विलायकहरूमा प्रोटीनको घुलनशीलता कम गर्ने दुई कारणहरू छन्: कसरी प्रोटिनलाई निर्जलीकरणको साथ नुन समाधानको रूपमा शुद्ध गर्ने; दोस्रो, ध्रुवीय विलायकहरूमा पानी भन्दा कार्बनिक विलायकहरूको डाइलेक्ट्रिक स्थिरता कम गर्न सकिन्छ।

3. प्रोटिन अवक्षेपण गर्ने एजेन्ट: प्रोटिनले अवक्षेपण गर्ने एजेन्टको रूपमा मात्र एक प्रकार वा प्रोटिन अवक्षेपणमा कार्य गर्दछ, सामान्यहरू क्षारीय, प्रोटीन, लेक्टिन र भारी धातुहरू हुन्।

4. Polyethylene glycol precipitation: पानीमा घुलनशील गैर-आयनिक पोलिमर कसरी शुद्ध गर्नेप्रोटीन शुद्धीकरण, जस्तै पोलीथिलीन ग्लाइकोल र सोडियम डेक्सट्रान सल्फेट प्रोटिनहरू अवक्षेपण गर्न।