X'inhu l-metodu ta 'purifikazzjoni tal-sistema ta 'purifikazzjoni tal-proteini? Huwa meħtieġ li tkun taf is-sekwenza tad-DNA tal-kodifikazzjoni tal-proteina purifikata, biex tara liema ċelluli jew tessuti huma espressi żżejjed fil-ġene fil-mira, u li tiddisinja primers tal-ġeni biex tkabbar l-arf tal-framment tad-DNA fil-mira. Dan huwa l-hekk imsejjaħ akkwist ta 'frammenti tal-ġeni fil-mira.

Kostruzzjoni tal-vettur tal-espressjoni: Fil-vettur tal-espressjoni prokarjotiku jew ewkarjotiku bil-karatteristiċi tal-espressjoni tal-ġene miksuba nnifisha, il-problema ewlenija ta 'dan il-pass hija li jinbena l-plasmid u l-ġene ta' interess, u s-sistema tal-espressjoni. Il-ħin ta 'espressjoni prokarjotiku huwa qasir, l-ispiża hija baxxa, u ammont kbir ta' espressjoni hija prijorità; il-ġene mhuwiex espress f'E. coli, u l-problema sseħħ fl-ottimizzazzjoni tal-kodon. B'kunsiderazzjoni ta 'attività aħjar u purifikazzjoni tal-proteina, ir-riċerkaturi għażlu li jesprimu fil-ħmira Pichi. L-espressjoni b'suċċess tal-ottimizzazzjoni tal-kodon hija importanti.

X'inhu l-metodu ta 'purifikazzjoni tas-sistema ta' purifikazzjoni tal-proteini:

1. Preċipitazzjoni.

2. Elettroforeżi: Proteina ċċarġjata hija ogħla jew aktar baxxa mill-punt iżoelettriku tagħha u tista 'tiġi mċaqlaq għall-elettrodu negattiv jew l-elettrodu pożittiv tal-kamp elettriku fil-kamp elettriku. Appoġġ elettroforesi tal-film, elettroforesi, eċċ.

3. Dijalisi: Metodu li juża żewġ boroż tad-dijalisi biex jifred molekuli kbar minn proteini u komposti organiċi molekulari żgħar.

4. Kromatografija: Il-kromatografija ta 'skambju ta' joni tuża l-proprjetajiet ħielsa tal-proteini. Taħt pH speċifiku, il-piżijiet u l-proprjetajiet tal-proteini huma differenti, u jistgħu jiġu sseparati permezz ta 'kromatografija ta' skambju joniku. Fil-kromatografija ta 'skambju anjoniku, l-ewwel jiġu elużi proteini b'qawwa negattiva baxxa. Għarbiel molekulari, magħrufa wkoll bħala filtrazzjoni tal-ġel. Proteini żgħar jidħlu fil-pori u jibqgħu fihom għal żmien twil. Proteini kbar ma jistgħux jidħlu fil-pori u joħorġu direttament.

5. X'inhu l-metodu ta 'purifikazzjoni tal-sistema ta 'purifikazzjoni tal-proteini? Ultracentrifugazzjoni: Il-purifikazzjoni tal-proteini tista 'tintuża biex tiddetermina l-piż molekulari u tista' tintuża bħala l-proteina. Il-formazzjoni ta 'proteini b'densitajiet differenti hija separata.