L-aċidu nuklejku huwa maqsum f'aċidu deossiribonuklejku (DNA) u aċidu ribonuklejku (RNA), li fosthom l-RNA jista 'jinqasam f'RNA ribosomali (rRNA), RNA messaġġier (mRNA) u RNA ta' trasferiment (tRNA) skont funzjonijiet differenti.

Id-DNA huwa kkonċentrat prinċipalment fin-nukleu, il-mitokondrija u l-kloroplasti, filwaqt li l-RNA huwa distribwit prinċipalment fiċ-ċitoplasma.

Minħabba li l-bażijiet tal-purini u l-bażijiet tal-pirimidini għandhom rabtiet doppji konjugati fl-aċidi nuklejċi, l-aċidi nuklejċi għandhom il-karatteristiċi ta 'assorbiment ultravjola. L-assorbiment ultravjola tal-melħ tas-sodju tad-DNA huwa ta 'madwar 260nm, u l-assorbiment tiegħu huwa espress bħala A260, u huwa fil-ħawt ta' assorbiment f'230nm, għalhekk tista 'tintuża l-ispettroskopija ultravjola. L-aċidi nukleiċi huma ddeterminati kwantitattivament u kwalitattivament minn luminometru.

L-aċidi nukleiċi huma amfoliti, li huma ekwivalenti għal poliaċidi. L-aċidi nukleiċi jistgħu jiġu dissoċjati f'anjoni bl-użu ta 'buffers newtrali jew alkalini, u mqiegħda f'kamp elettriku biex jimxu lejn l-anodu. Dan huwa l-prinċipju tal-elettroforeżi.

Prinċipji u rekwiżiti ta 'estrazzjoni u purifikazzjoni ta' aċidu nuklejku

1. Tiżgura l-integrità tal-istruttura primarja tal-aċidu nuklejku

2. Elimina l-kontaminazzjoni ta 'molekuli oħra (bħall-esklużjoni tal-interferenza tal-RNA meta tiġbed id-DNA)

3. M'għandux ikun hemm solventi organiċi u konċentrazzjonijiet għoljin ta 'jonji tal-metall li jinibixxu l-enzimi f'kampjuni ta' aċidu nuklejku

4. Naqqas sustanzi makromolekulari bħal proteini, polisakkaridi u lipidi kemm jista 'jkun

Estrazzjoni ta 'aċidu nuklejku u metodu ta' purifikazzjoni

1. Metodu ta 'estrazzjoni ta' fenol/kloroform

Ġie ivvintat fl-1956. Wara li ttratta l-likwidu miksur taċ-ċellula jew l-omoġenat tat-tessut bil-fenol/kloroform, il-komponenti tal-aċidu nuklejku, prinċipalment id-DNA, huma maħlula fil-fażi milwiema, il-lipidi huma prinċipalment fil-fażi organika, u l-proteini jinsabu bejn it-tnejn. fażijiet.

2. Preċipitazzjoni ta 'alkoħol

L-etanol jista 'jelimina s-saff ta' idratazzjoni ta 'aċidu nuklejku u jesponi l-grupp tal-fosfat iċċarġjat b'mod negattiv, u joni ċċarġjati b'mod pożittiv bħal NA﹢ jistgħu jingħaqdu mal-grupp tal-fosfat biex jiffurmaw preċipitat.

3. Metodu tal-kolonna kromatografika

Permezz tal-materjal ta 'assorbiment speċjali bbażat fuq is-silika, id-DNA jista' jiġi adsorbit speċifikament, filwaqt li l-RNA u l-proteina jistgħu jgħaddu mingħajr xkiel, u mbagħad uża melħ għoli u pH baxx biex jorbot l-aċidu nuklejku, u elute b'melħ baxx u pH għoli biex jissepara u jippurifika nuklejku aċidu.

4. Metodu alkali tal-qsim termali

L-estrazzjoni alkalina prinċipalment tuża d-differenzi topoloġiċi bejn plasmidi ċirkolari magħluqa b'mod kovalenti u kromatina lineari biex tisseparahom. Taħt kundizzjonijiet alkalini, il-proteini żnaturati huma solubbli.

5. Metodu ta 'piroliżi tat-togħlija

Is-soluzzjoni tad-DNA hija ttrattata bis-sħana biex tieħu vantaġġ mill-proprjetajiet tal-molekuli tad-DNA lineari biex tissepara l-frammenti tad-DNA mill-preċipitat iffurmat minn proteini żnaturati u debris ċellulari permezz ta 'ċentrifugazzjoni.

6. Metodu taż-żibeġ nanomanjetiċi

Bl-użu tan-nanoteknoloġija biex ittejjeb u timmodifika l-wiċċ ta 'nanopartiċelli superparamanjetiċi, żibeġ nano-manjetiċi ta' ossidu tas-silikon superparamanjetiku huma ppreparati. Iż-żibeġ manjetiċi jistgħu speċifikament jagħrfu u jingħaqdu b'mod effiċjenti ma 'molekuli ta' aċidu nuklejku fuq interface mikroskopiku. Bl-użu tal-proprjetajiet superparamanjetiċi tan-nanosferi tas-silika, taħt l-azzjoni ta 'melħ Chaotropic (guanidine hydrochloride, guanidine isothiocyanate, eċċ.) U kamp manjetiku estern, DNA u RNA ġew iżolati mid-demm, tessut tal-annimali, ikel, mikro-organiżmi patoġeniċi u kampjuni oħra .