Is-separazzjoni u l-purifikazzjoni tal-proteini tintuża ħafna fir-riċerka u l-applikazzjoni tal-bijokimika u hija ħila operattiva importanti. Ċellula ewkarjotika tipika jista 'jkun fiha eluf ta' proteini differenti, xi wħud huma sinjuri ħafna u xi wħud fihom biss ftit kopji. Sabiex tistudja ċertuproteina, huwa meħtieġ li l-ewwel tiġi purifikata l-proteina minn proteini oħra u molekuli mhux proteini.

1. Metodu ta 'tmelliħ ta'proteina:

Il-melħ newtrali għandu effett sinifikanti fuq is-solubilità tal-proteina. Ġeneralment, biż-żieda tal-konċentrazzjoni tal-melħ taħt konċentrazzjoni baxxa tal-melħ, is-solubilità tal-proteina tiżdied. Dan jissejjaħ tmelliħ; meta l-konċentrazzjoni tal-melħ tkompli tiżdied, Is-solubilità tal-proteina tonqos fi gradi varji u tissepara waħda wara l-oħra. Dan il-fenomenu jissejjaħ tmelliħ.

2. Metodu ta 'stivar tal-punt iżoelettriku:

Ir-repulsjoni elettrostatika bejn il-partiċelli hija l-iżgħar meta l-proteina tkun statika, għalhekk is-solubilità hija wkoll l-iżgħar. Il-punti iżoelettriċi ta 'diversi proteini huma differenti. Il-pH tas-soluzzjoni ta 'kondizzjonament jista' jintuża biex jilħaq il-punt iżoelettriku ta 'proteina Agħmel jakkumula, iżda dan il-metodu rarament jintuża waħdu u jista' jiġi kkombinat mal-metodu tat-tmelliħ.

3.Dijaliżi u ultrafiltrazzjoni:

Id-dijalisi tuża membrana semi-permeabbli biex tissepara proteini ta 'daqsijiet molekulari differenti. Il-metodu ta 'ultrafiltrazzjoni juża pressjoni għolja jew forza ċentrifugali biex l-ilma u molekuli żgħar oħra ta' solut jgħaddu minn membrana semi-permeabbli, filwaqt li l-proteinajibqa' fuq il-membrana. Tista 'tagħżel daqsijiet ta' pori differenti biex tinterċetta proteini ta 'piżijiet molekulari differenti.

4.Metodu ta 'filtrazzjoni tal-ġel:

Imsejħa wkoll kromatografija ta 'esklużjoni tad-daqs jew kromatografija ta' għarbiel molekulari, dan huwa wieħed mill-aktar metodi utli għas-separazzjoni ta 'taħlitiet ta' proteini skond id-daqs molekulari. Il-materjali tal-ippakkjar aktar komunement użati fil-kolonna huma ġel tal-glukosju (Sephadex ged) u ġel tal-agarose (ġell tal-agarose).

5.Electrophoresis:

Taħt l-istess kundizzjoni ta 'pH, diversi proteini jistgħu jiġu sseparati minħabba l-piżijiet molekulari differenti tagħhom u ħlasijiet differenti fil-kamp elettriku. Ta 'min joqgħod attent għall-elettroforeżi tas-sett iżoelettriku, li juża ampholyte bħala trasportatur. Waqt l-elettroforeżi, l-ampholyte jifforma gradjent tal-pH miżjud gradwalment mill-elettrodu pożittiv għall-elettrodu negattiv. Meta l-proteina b'ċertu ħlas tgħum fiha, se tilħaq lil xulxin. Il-pożizzjoni tal-pH tal-punt elettriku hija mhux kontinwa, u dan il-metodu jista 'jintuża biex janalizza u jipprepara diversi proteini.

6.Kromatografija tal-komunikazzjoni tal-joni:

aġenti ta 'komunikazzjoni joniċi jinkludu aġenti ta' komunikazzjoni katjoniċi (bħal carboxymethyl cellulose; CM-cellulose) u aġenti ta 'komunikazzjoni anjoniċi (diethylaminoethyl cellulose). Meta tgħaddi mill-kolonna tal-kromatografija tal-komunikazzjoni tal-joni, il-proteina b'ċarġ oppost għall-aġent tal-komunikazzjoni tal-joni hija adsorbita fuq l-aġent tal-komunikazzjoni tal-joni, u mbagħad l-adsorbitproteinajiġi eluwit billi tinbidel il-pH jew is-saħħa jonika.

7.Kromatografija ta' affinità:

Il-kromatografija ta 'affinità hija metodu estremament utli għas-separazzjoni tal-proteini. Ħafna drabi jeħtieġ pass wieħed biss biex tiġi separata ċerta proteina biex tiġi ppurifikata minn taħlita ta 'proteini messy b'purità għolja.

Dan il-metodu huwa bbażat fuq ir-rabta speċifika aktar milli kovalenti ta 'ċerti proteini ma' molekula oħra msejħa ligand (Ligand).

Il-prinċipju bażiku:

proteini jeżistu f'taħlita messy f'tessuti jew ċelloli, u kull tip ta 'ċellula fih eluf ta' proteini differenti. Għalhekk, id-distinzjoni bejn il-proteini hija parti importanti mill-bijokimika, u ma kinitx waħedha. Jew sett ta 'metodi lesti jistgħu jneħħu kwalunkwe tip ta' proteina minn proteina mħallta messy, għalhekk bosta metodi huma spiss użati flimkien.