Metodi ta'purifikazzjoni tal-proteini:

Il-metodu ta 'purifikazzjoni tal-proteini, separazzjoni u purifikazzjoni tal-proteina, il-proteina hija rilaxxata miċ-ċelloli jew tessuti oriġinali fi stat maħlul u tibqa' fl-istat naturali oriġinali mingħajr telf ta 'attività bijoloġika. Għal din ir-raġuni, il-materjal għandu jneħħi t-tessut tal-annimali u tax-xaħam, il-materjal taż-żerriegħa għandu saħansitra jqaxxar il-kontaminazzjoni tal-kisja taż-żerriegħa minn sustanzi bħal tannini, u ż-żerriegħa taż-żejt għandha preferibbilment tuża solvent organiku li jagħli baxx.

1. Il-metodu ta 'purifikazzjoni tal-proteini, daqs u metodi ta' analiżi ta 'separazzjoni differenti: dijalisi u ultrafiltrazzjoni jużaw dawn il-proteini biex jgħaddu min-natura ta' molekuli li ma jistgħux jgħaddu mill-membrana semi-permeabbli; ċentrifugazzjoni tal-gradjent tad-densità Il-kwalità u d-densità tal-proteina fil-medju se jkollhom impatt akbar fuq il-partiċelli. Il-veloċità tas-saldu hija aktar mgħaġġla; Il-filtrazzjoni tal-ġell hija tip ta 'kromatografija tal-kolonna.

2. Separazzjoni tad-differenza tas-solubilità fl-użu: elettro-preċipitazzjoni minħabba li l-ħlas nett tal-molekuli tal-proteini huwa f'punt iżoelettriku żero, tnaqqas ir-repulsjoni elettrostatika bejn il-molekuli, faċli biex tiġbor, u solubilità minima; soluzzjoni tal-melħ użata mas-soluzzjoni tal-melħ Il-konċentrazzjoni żżid jew tnaqqas is-solubilità tal-proteina.

3. Il-ħlas huwa separat u analizzat b'metodi differenti, il-kontenuti ewlenin jinkludu elettroforeżi u kromatografija ta 'skambju joniku.

4. Metodi ta 'purifikazzjoni tal-proteiniL-assorbiment selettiv u s-separazzjoni tal-proteini jutilizzaw is-saħħa tal-adsorbiment tal-partiċelli.

5. Il-kromatografija ta 'affinità hija bbażata fuq is-separazzjoni tal-ligands. Din il-karatteristika bijoloġika tippermetti li molekuli tal-proteini jorbtu speċifikament aktar milli b'mod kovalenti ma 'molekula oħra msejħa ligand.

6. Metodu ta 'purifikazzjoni tal-proteini: Metodu ta' preċipitazzjoni ta 'solvent organiku f'temperatura baxxa: Uża solventi organiċi li jitħalltu ma' l-ilma, bħal metanol, etanol, biex tnaqqas is-solubilità u l-preċipitazzjoni tal-biċċa l-kbira tal-proteini. Dan il-metodu huwa ogħla mir-riżoluzzjoni tmelliħ barra, iżda l-proteina tiddenatura aktar Meta faċli, għandu jsir f'temperatura baxxa.

Kif tippurifikapurifikazzjoni tal-proteini:

Kif tippurifika l-proteina, il-proteina hija molekula kbira, u diversi daqsijiet molekulari ta 'albumina, hemm xi metodi aktar sempliċi biex jiġu separati proteini u materjali ta' molekula żgħira, u wkoll taħlita ta 'proteini separata. Il-metodi ewlenin għas-separazzjoni ta 'proteini ta' daqs molekulari differenti huma dijalisi, ultrafiltrazzjoni, filtrazzjoni tal-ġel, u separazzjoni ċentrifugali. Id-dijalisi u l-ultrafiltrazzjoni huma komunement użati fil-metodi ta 'separazzjoni tal-proteini. It-taħlita tad-dijalisi li trid tiġi sseparata titqiegħed f'borża tad-dijalisi magħmula minn membrana semipermeabbli, u mbagħad mgħaddsa fis-soluzzjoni tad-dijalisi għas-separazzjoni. L-ultrafiltrazzjoni hija l-proċess li jgħaddi l-ilma u molekuli żgħar oħra bl-użu ta 'forza ċentrifugali jew pressjoni f'membrana semi-permeabbli u proteini li jinqabdu fil-membrana semi-permeabbli. Dawn iż-żewġ metodi jistgħu jiġu separati minn makromolekuli bbażati fuq proteini u molekuli żgħar ibbażati fuq melħ inorganiku. Ħafna drabi huma mmellaħ, użati flimkien mal-metodu ta 'dissoluzzjoni tal-melħ, jew jistgħu jiġu introdotti biex jieħdu dawn iż-żewġ metodi wara t-tmelliħ bl-użu ta' soluzzjonijiet ta 'melħ inorganiku.

1. Kif tippurifika l-proteina bil-metodu tat-tmelliħ: Il-bażi tal-metodu tat-tmelliħ hija li s-solubilità tal-proteina f'soluzzjoni tal-melħ dilwita tiżdied maż-żieda tal-konċentrazzjoni tal-melħ, iżda meta l-konċentrazzjoni tal-melħ tiżdied għal ċertu valur, il- se tiżdied l-attività tal-ilma. Tnaqqis, li mbagħad jista 'jikkawża li xi proteini jiġġeneraw ħlasijiet permezz tal-wiċċ tal-istruttura molekulari biex jiġu newtralizzati gradwalment, u l-membrana ta' idratazzjoni tinqered gradwalment, li eventwalment tista 'tikkawża li proteini u molekuli relatati jiżviluppaw agglomerazzjoni u jippreċipitaw minn soluzzjonijiet differenti.

2. Metodu ta 'preċipitazzjoni tas-solvent organiku: Hemm żewġ raġunijiet biex titnaqqas is-solubilità tal-proteina f'solventi organiċi: kif tippurifika l-proteina bħala soluzzjoni tal-melħ b'deidrazzjoni; it-tieni nett, il-kostanti dielettrika ta 'solventi organiċi milli ilma jista' jitnaqqas F'solventi polari.

3. Aġent ta 'preċipitazzjoni tal-proteini: proteina bħala aġent ta' preċipitazzjoni taġixxi biss fuq tip wieħed jew wieħed ta 'preċipitazzjoni ta' proteina, dawk komuni huma alkalini, proteini, lectin, u metalli tqal.

4. Preċipitazzjoni tal-polyethylene glycol: Kif tippurifika polimeri mhux joniċi li jinħallu fl-ilma għalpurifikazzjoni tal-proteini, bħal polyethylene glycol u sodium dextran sulfate biex jippreċipita proteini.