Asid nukleik dibahagikan kepada asid deoksiribonukleik (DNA) dan asid ribonukleik (RNA), antaranya RNA boleh dibahagikan kepada RNA ribosom (rRNA), RNA messenger (mRNA) dan RNA pemindahan (tRNA) mengikut fungsi yang berbeza.

DNA terutamanya tertumpu dalam nukleus, mitokondria dan kloroplas, manakala RNA diedarkan terutamanya dalam sitoplasma.

Oleh kerana bes purin dan bes pirimidin mempunyai ikatan rangkap terkonjugasi dalam asid nukleik, asid nukleik mempunyai ciri-ciri penyerapan ultraungu. Penyerapan ultraviolet garam natrium DNA adalah sekitar 260nm, dan penyerapannya dinyatakan sebagai A260, dan ia berada pada palung penyerapan pada 230nm, jadi spektroskopi ultraviolet boleh digunakan. Asid nukleik ditentukan secara kuantitatif dan kualitatif oleh luminometer.

Asid nukleik adalah amfolit, yang bersamaan dengan poliasid. Asid nukleik boleh diasingkan kepada anion dengan menggunakan penampan neutral atau alkali, dan diletakkan dalam medan elektrik untuk bergerak ke arah anod. Ini adalah prinsip elektroforesis.

Pengekstrakan asid nukleik dan prinsip dan keperluan penulenan

1. Memastikan integriti struktur primer asid nukleik

2. Menghapuskan pencemaran molekul lain (seperti tidak termasuk gangguan RNA semasa mengekstrak DNA)

3. Tidak boleh ada pelarut organik dan kepekatan tinggi ion logam yang menghalang enzim dalam sampel asid nukleik

4. Kurangkan bahan makromolekul seperti protein, polisakarida dan lipid sebanyak mungkin

Kaedah pengekstrakan dan penulenan asid nukleik

1. Kaedah pengekstrakan fenol/kloroform

Ia telah dicipta pada tahun 1956. Selepas merawat cecair pecah sel atau homogenat tisu dengan fenol/kloroform, komponen asid nukleik, terutamanya DNA, dibubarkan dalam fasa akueus, lipid terutamanya dalam fasa organik, dan protein terletak di antara kedua-duanya. fasa.

2. Pemendakan alkohol

Etanol boleh menghapuskan lapisan penghidratan asid nukleik dan mendedahkan kumpulan fosfat bercas negatif, dan ion bercas positif seperti NA﹢ boleh bergabung dengan kumpulan fosfat untuk membentuk mendakan.

3. Kaedah lajur kromatografi

Melalui bahan penjerapan berasaskan silika khas, DNA boleh diserap secara khusus, manakala RNA dan protein boleh melalui dengan lancar, dan kemudian menggunakan garam tinggi dan pH rendah untuk mengikat asid nukleik, dan elusi dengan garam rendah dan pH tinggi untuk memisahkan dan membersihkan nukleik. asid.

4. Kaedah alkali retak haba

Pengekstrakan alkali terutamanya menggunakan perbezaan topologi antara plasmid bulat tertutup secara kovalen dan kromatin linear untuk memisahkannya. Di bawah keadaan beralkali, protein yang didenaturasi boleh larut.

5. Kaedah pirolisis mendidih

Penyelesaian DNA dirawat haba untuk memanfaatkan sifat molekul DNA linear untuk memisahkan serpihan DNA daripada mendakan yang dibentuk oleh protein ternyahatur dan serpihan selular melalui sentrifugasi.

6. Kaedah manik nanomagnet

Menggunakan nanoteknologi untuk menambah baik dan mengubah suai permukaan nanopartikel superparamagnet, manik nano-magnet silikon oksida superparamagnet disediakan. Manik magnetik secara khusus boleh mengenali dan mengikat molekul asid nukleik dengan cekap pada antara muka mikroskopik. Menggunakan sifat superparamagnetik nanosfera silika, di bawah tindakan garam Chaotropic (guanidine hydrochloride, guanidine isothiocyanate, dll.) dan medan magnet luaran, DNA dan RNA diasingkan daripada darah, tisu haiwan, makanan, mikroorganisma patogen dan sampel lain .