प्रथिनांचे पृथक्करण आणि शुद्धीकरण हे बायोकेमिस्ट्री संशोधन आणि अनुप्रयोगामध्ये मोठ्या प्रमाणावर वापरले जाते आणि हे एक महत्त्वाचे ऑपरेशनल कौशल्य आहे. एससीजी प्रोटीन प्युरिफिकेशन सिस्टम कंपनी-साइपू इन्स्ट्रुमेंटने क्रूड सेपरेशन आणि बारीक पृथक्करण सामग्री संकलित केली आहे.प्रथिनेप्रत्येकासाठी शुद्धीकरण. ठराविक युकेरियोटिक सेलमध्ये हजारो भिन्न प्रथिने असू शकतात, काही खूप समृद्ध असतात आणि काहींमध्ये फक्त काही प्रत असतात. विशिष्ट प्रथिनांचा अभ्यास करण्यासाठी, प्रथम प्रथिने इतर प्रथिने आणि नॉन-प्रोटीन रेणूंपासून शुद्ध करणे आवश्यक आहे.

खडबडीत पृथक्करण

जेव्हा प्रथिने अर्क (कधीकधी न्यूक्लिक ॲसिड्स, पॉलिसेकेराइड्स इ. मिसळून) मिळवला जातो, तेव्हा इच्छित वेगळे करण्यासाठी योग्य पद्धतींचा संच निवडला जातो.प्रथिनेइतर अशुद्धी पासून. साधारणपणे, पृथक्करणाची ही पायरी सॉल्टिंग आऊट, आयसोइलेक्ट्रिक पॉइंट जमा करणे आणि सेंद्रिय सॉल्व्हेंट फ्रॅक्शनेशन या पद्धती वापरते. या पद्धती साधेपणा आणि मोठ्या प्रक्रियेची क्षमता द्वारे दर्शविले जातात, ज्यामुळे अनेक अशुद्धता काढून टाकता येतात आणि प्रथिने द्रावण केंद्रित होते. काही प्रथिने अर्क मोठ्या प्रमाणात असतात आणि ते जमा करून किंवा खारट करून एकाग्रतेसाठी योग्य नसतात. तुम्ही अल्ट्राफिल्ट्रेशन, जेल फिल्टरेशन, फ्रीझिंग व्हॅक्यूम ड्रायिंग किंवा एकाग्रतेसाठी इतर पद्धती निवडू शकता.

सुरेख पृथक्करण

नमुन्याच्या उग्र अंशीकरणानंतर, खंड सामान्यतः लहान असतो आणि बहुतेक अशुद्धता काढून टाकल्या जातात. पुढील शुद्धीकरणासाठी, क्रोमॅटोग्राफी पद्धतींमध्ये सामान्यतः जेल फिल्टरेशन, आयन एक्सचेंज क्रोमॅटोग्राफी, शोषण क्रोमॅटोग्राफी आणि ॲफिनिटी क्रोमॅटोग्राफी यांचा समावेश होतो. आवश्यक असल्यास, आपण अंतिम शुद्धीकरण प्रक्रिया म्हणून झोन इलेक्ट्रोफोरेसीस, आयसोइलेक्ट्रिक पॉइंट सेट इत्यादीसह इलेक्ट्रोफोरेसीस देखील निवडू शकता. उपविभाग स्तर वेगळे करण्यासाठी वापरलेली पद्धत साधारणपणे नियोजनात लहान असते, परंतु उच्च रिझोल्यूशनसह.

क्रिस्टलायझेशन ही प्रथिने पृथक्करण आणि शुद्धीकरणाची अंतिम प्रक्रिया आहे. जरी क्रिस्टलायझेशन प्रक्रिया हे सुनिश्चित करत नाही की प्रथिने एकसमान असणे आवश्यक आहे, परंतु जेव्हा विशिष्ट प्रथिनांना स्फटिक तयार करण्यासाठी द्रावणात फायदा होतो तेव्हाच. क्रिस्टलायझेशन प्रक्रिया स्वतःच काही प्रमाणात शुद्धीकरणासह असते आणि पुनर्क्रिस्टलायझेशन थोड्या प्रमाणात भेसळयुक्त प्रथिने काढून टाकू शकते. विकृत झाल्यापासूनप्रथिनेक्रिस्टलायझेशन प्रक्रियेदरम्यान कधीही आढळले नाही, प्रोटीन क्रिस्टलायझेशन हे केवळ शुद्धतेचे लक्षण नाही तर उत्पादन त्याच्या नैसर्गिक स्थितीत आहे हे निर्धारित करण्यासाठी एक शक्तिशाली मार्गदर्शक तत्त्व देखील आहे.