न्यूक्लिक ॲसिड एक्स्ट्रॅक्शन कॉलम एक्सट्रॅक्शन पद्धत आणि तत्त्व

न्यूक्लिक ॲसिड डिऑक्सीरिबोन्यूक्लिक ॲसिड (DNA) आणि रिबोन्यूक्लिक ॲसिड (RNA) मध्ये विभागले गेले आहे, त्यापैकी RNA वेगवेगळ्या कार्यांनुसार राइबोसोमल RNA (rRNA), मेसेंजर RNA (mRNA) आणि ट्रान्सफर RNA (tRNA) मध्ये विभागले जाऊ शकते.

डीएनए मुख्यत्वे न्यूक्लियस, माइटोकॉन्ड्रिया आणि क्लोरोप्लास्टमध्ये केंद्रित आहे, तर आरएनए प्रामुख्याने साइटोप्लाझममध्ये वितरीत केले जाते.

कारण प्युरीन बेस आणि पायरीमिडीन बेसमध्ये न्यूक्लिक ॲसिडमध्ये दुहेरी बंध जोडलेले असतात, न्यूक्लिक ॲसिडमध्ये अल्ट्राव्हायोलेट शोषणाची वैशिष्ट्ये असतात. डीएनए सोडियम क्षारांचे अल्ट्राव्हायोलेट शोषण सुमारे 260nm असते आणि त्याचे शोषण A260 म्हणून व्यक्त केले जाते आणि ते शोषण कुंडावर 230nm असते, म्हणून अल्ट्राव्हायोलेट स्पेक्ट्रोस्कोपी वापरली जाऊ शकते. न्यूक्लिक ॲसिड्स ल्युमिनोमीटरद्वारे परिमाणात्मक आणि गुणात्मकरित्या निर्धारित केले जातात.

न्यूक्लिक ॲसिड्स ॲम्फोलाइट्स आहेत, जे पॉलीॲसिड्सच्या समतुल्य आहेत. न्यूक्लिक ॲसिड्स न्यूट्रल किंवा क्षारीय बफर वापरून आयनांमध्ये विलग केले जाऊ शकतात आणि एनोडच्या दिशेने जाण्यासाठी इलेक्ट्रिक फील्डमध्ये ठेवले जाऊ शकतात. हे इलेक्ट्रोफोरेसीसचे तत्त्व आहे.

न्यूक्लिक ॲसिड एक्स्ट्रॅक्शन कॉलम एक्सट्रॅक्शन पद्धत आणि तत्त्व

न्यूक्लिक ॲसिड निष्कर्षण आणि शुद्धीकरण तत्त्वे आणि आवश्यकता

1. न्यूक्लिक ॲसिड प्राथमिक संरचनेची अखंडता सुनिश्चित करा

2. इतर रेणूंची दूषितता दूर करा (जसे की डीएनए काढताना आरएनए हस्तक्षेप वगळणे)

3. न्यूक्लिक ॲसिडच्या नमुन्यांमध्ये एंजाइम रोखणारे कोणतेही सेंद्रिय सॉल्व्हेंट्स आणि धातूच्या आयनांची उच्च सांद्रता नसावी.

4. प्रथिने, पॉलिसेकेराइड्स आणि लिपिड्स सारखे मॅक्रोमोलेक्युलर पदार्थ शक्य तितके कमी करा

न्यूक्लिक ॲसिड काढण्याची आणि शुद्धीकरणाची पद्धत

1. फिनॉल/क्लोरोफॉर्म काढण्याची पद्धत

1956 मध्ये त्याचा शोध लावला गेला. सेल तुटलेल्या द्रव किंवा टिश्यू होमोजेनेटवर फिनॉल/क्लोरोफॉर्मसह उपचार केल्यानंतर, न्यूक्लिक ॲसिड घटक, प्रामुख्याने डीएनए, जलीय अवस्थेत विरघळतात, लिपिड्स प्रामुख्याने सेंद्रिय अवस्थेत असतात आणि प्रथिने दोन दरम्यान स्थित असतात. टप्पे

2. अल्कोहोल पर्जन्य

इथेनॉल न्यूक्लिक ॲसिडचा हायड्रेशन लेयर काढून टाकू शकतो आणि नकारात्मक चार्ज केलेला फॉस्फेट गट उघड करू शकतो आणि NA﹢ सारखे सकारात्मक चार्ज केलेले आयन फॉस्फेट गटाशी एकत्र येऊन एक अवक्षेप तयार करू शकतात.

3. क्रोमॅटोग्राफिक स्तंभ पद्धत

विशेष सिलिका-आधारित शोषण सामग्रीद्वारे, डीएनए विशेषतः शोषले जाऊ शकतात, तर आरएनए आणि प्रथिने सहजतेने जाऊ शकतात आणि नंतर न्यूक्लिक ॲसिड बांधण्यासाठी उच्च मीठ आणि कमी पीएच वापरतात आणि न्यूक्लिक वेगळे आणि शुद्ध करण्यासाठी कमी मीठ आणि उच्च पीएच असलेले एल्युट वापरतात. आम्ल

4. थर्मल क्रॅकिंग अल्कली पद्धत

क्षारीय निष्कर्षण मुख्यत्वे सहसंयोजक बंद गोलाकार प्लाझमिड्स आणि रेखीय क्रोमॅटिनमधील टोपोलॉजिकल फरक त्यांना वेगळे करण्यासाठी वापरते. अल्कधर्मी परिस्थितीत, विकृत प्रथिने विद्रव्य असतात.

5. उकळत्या पायरोलिसिस पद्धत

डीएनए सोल्यूशनवर रेखीय डीएनए रेणूंच्या गुणधर्मांचा फायदा घेण्यासाठी उष्णतेवर उपचार केले जातात ज्यामुळे डीएनए तुकड्यांना विकृत प्रथिने आणि सेंट्रीफ्यूगेशनद्वारे सेल्युलर डेब्रिजद्वारे तयार होणाऱ्या अवक्षेपापासून वेगळे केले जाते.

6. नॅनोमॅग्नेटिक मणी पद्धत

सुपरपरामॅग्नेटिक नॅनोकणांच्या पृष्ठभागामध्ये सुधारणा आणि सुधारणा करण्यासाठी नॅनो तंत्रज्ञानाचा वापर करून, सुपरपरामॅग्नेटिक सिलिकॉन ऑक्साईड नॅनो-चुंबकीय मणी तयार केले जातात. चुंबकीय मणी सूक्ष्म इंटरफेसवर न्यूक्लिक ॲसिड रेणूंना ओळखू शकतात आणि कार्यक्षमतेने बांधू शकतात. सिलिका नॅनोस्फीअर्सच्या सुपरपरामॅग्नेटिक गुणधर्मांचा वापर करून, चाओट्रॉपिक क्षार (ग्वानिडाइन हायड्रोक्लोराइड, ग्वानिडाइन आयसोथियोसायनेट इ.) आणि बाह्य चुंबकीय क्षेत्र, डीएनए आणि आरएनए रक्त, प्राण्यांच्या ऊती, अन्न, रोगजनक सूक्ष्मजीव आणि इतर नमुने यांच्यापासून वेगळे केले गेले.


पोस्ट वेळ: मार्च-18-2022
TOP