च्या पद्धतीप्रथिने शुद्धीकरण:

प्रथिने शुद्धीकरण, प्रथिनांचे पृथक्करण आणि शुद्धीकरणाची पद्धत, प्रथिने मूळ पेशी किंवा ऊतींमधून विरघळलेल्या अवस्थेत सोडले जातात आणि जैविक क्रियाकलाप गमावल्याशिवाय मूळ नैसर्गिक स्थितीत राहतात. या कारणास्तव, सामग्रीने प्राणी आणि ऍडिपोज टिश्यू काढून टाकले पाहिजे, बियाण्यांच्या सामग्रीने टॅनिनसारख्या पदार्थांपासून बियाणे आवरणातील दूषितपणा देखील काढून टाकला पाहिजे आणि तेल बियाणे शक्यतो कमी उकळणारे सेंद्रिय सॉल्व्हेंट वापरावे.

1. प्रथिने शुद्धीकरणाची पद्धत, आकार आणि भिन्न पृथक्करण विश्लेषण पद्धती: डायलिसिस आणि अल्ट्राफिल्ट्रेशन या प्रथिनांचा वापर अर्ध-पारगम्य पडद्यामधून जाऊ शकत नसलेल्या रेणूंच्या स्वरूपातून जाण्यासाठी करतात; घनता ग्रेडियंट सेंट्रीफ्यूगेशन माध्यमातील प्रथिनांची गुणवत्ता आणि घनता कणांवर जास्त परिणाम करेल. सेटलमेंट वेगवान आहे; जेल फिल्टरेशन हे एक प्रकारचे कॉलम क्रोमॅटोग्राफी आहे.

2. वापरातील विद्राव्यता फरकाचे पृथक्करण: प्रथिने रेणूंचा निव्वळ चार्ज शून्य समविद्युत बिंदूवर असल्यामुळे इलेक्ट्रो-पर्जन्य, रेणूंमधील इलेक्ट्रोस्टॅटिक प्रतिकर्षण कमी करते, एकत्रित करणे सोपे आणि किमान विद्राव्यता; मीठ द्रावणासह वापरलेले मीठ द्रावण एकाग्रता वाढवते किंवा प्रोटीनची विद्राव्यता कमी करते.

3. चार्ज वेगळे केले जाते आणि वेगवेगळ्या पद्धतींनी विश्लेषण केले जाते, मुख्य सामग्रीमध्ये इलेक्ट्रोफोरेसीस आणि आयन एक्सचेंज क्रोमॅटोग्राफी समाविष्ट आहे.

4. च्या पद्धतीप्रथिने शुद्धीकरणप्रथिनांचे निवडक शोषण आणि पृथक्करण कण शोषणाच्या ताकदीचा वापर करतात.

5. एफिनिटी क्रोमॅटोग्राफी लिगँड्सच्या पृथक्करणावर आधारित आहे. हे जैविक वैशिष्ट्य प्रथिने रेणूंना लिगँड नावाच्या दुसऱ्या रेणूशी सहसंयोजकतेने जोडण्याऐवजी विशेषतः बांधू देते.

6. प्रथिने शुद्धीकरणाची पद्धत: कमी-तापमानातील सेंद्रिय सॉल्व्हेंट पर्जन्य पद्धत: बहुतेक प्रथिनांची विद्राव्यता आणि पर्जन्य कमी करण्यासाठी मिथेनॉल, इथेनॉल सारख्या सेंद्रिय सॉल्व्हेंट्सचा वापर करा जे पाण्यामध्ये मिसळले जातात. ही पद्धत सॉल्टिंग आउट रेझोल्यूशनपेक्षा जास्त आहे, परंतु प्रथिने अधिक कमी होतात जेव्हा सोपे असते, तेव्हा ते कमी तापमानात केले पाहिजे.

शुद्ध कसे करावेप्रथिने शुद्धीकरण:

प्रथिनांचे शुद्धीकरण कसे करावे, प्रथिने हा एक मोठा रेणू आहे आणि अल्ब्युमिनचे विविध आण्विक आकार, प्रथिने आणि लहान रेणू पदार्थ वेगळे करण्याच्या काही सोप्या पद्धती आहेत, तसेच प्रथिने मिश्रण वेगळे केले आहे. वेगवेगळ्या आण्विक आकारांची प्रथिने विभक्त करण्याच्या मुख्य पद्धती म्हणजे डायलिसिस, अल्ट्राफिल्ट्रेशन, जेल फिल्टरेशन आणि सेंट्रीफ्यूगल पृथक्करण. डायलिसिस आणि अल्ट्राफिल्ट्रेशन सामान्यतः प्रथिने वेगळे करण्याच्या पद्धतींमध्ये वापरले जातात. वेगळे करायचे डायलिसिस मिश्रण अर्धपारगम्य पडद्यापासून बनवलेल्या डायलिसिस बॅगमध्ये ठेवले जाते आणि नंतर वेगळे करण्यासाठी डायलिसिस द्रावणात बुडवले जाते. अल्ट्राफिल्ट्रेशन ही अर्ध-पारगम्य झिल्लीमध्ये केंद्रापसारक शक्ती किंवा दाब वापरून पाणी आणि इतर लहान रेणू पास करण्याची आणि अर्ध-पारगम्य पडद्यामध्ये प्रथिने अडकवण्याची प्रक्रिया आहे. या दोन पद्धती प्रथिने-आधारित मॅक्रोमोलेक्यूल्स आणि अकार्बनिक मीठ-आधारित लहान रेणूंपासून वेगळे केल्या जाऊ शकतात. ते बहुतेकदा मीठ विरघळवण्याच्या पद्धतीसह वापरल्या जातात, किंवा अकार्बनिक मीठ द्रावण वापरून मीठ काढल्यानंतर या दोन पद्धती बाहेर काढण्यासाठी वापरल्या जाऊ शकतात.

1. सॉल्टिंग-आउट पद्धतीने प्रथिने कशी शुद्ध करावी: सॉल्टिंग-आउट पद्धतीचा आधार असा आहे की सौम्य मीठ द्रावणातील प्रथिनांची विद्राव्यता मीठ एकाग्रतेच्या वाढीसह वाढते, परंतु जेव्हा मीठ एकाग्रता एका विशिष्ट मूल्यापर्यंत वाढते, पाणी क्रियाकलाप वाढेल. कमी होते, ज्यामुळे काही प्रथिने आण्विक संरचनेच्या पृष्ठभागाद्वारे शुल्क निर्माण करण्यासाठी हळूहळू तटस्थ होऊ शकतात आणि हायड्रेशन झिल्ली हळूहळू नष्ट होते, ज्यामुळे अखेरीस संबंधित प्रथिने आणि रेणू एकत्रितपणे विकसित होऊ शकतात आणि वेगवेगळ्या सोल्यूशन्समधून अवक्षेपण होऊ शकतात.

2. सेंद्रिय सॉल्व्हेंट पर्जन्य पद्धत: सेंद्रिय सॉल्व्हेंट्समधील प्रथिनांची विद्राव्यता कमी करण्याची दोन कारणे आहेत: निर्जलीकरणासह मीठ द्रावण म्हणून प्रथिने कसे शुद्ध करावे; दुसरे म्हणजे, ध्रुवीय सॉल्व्हेंट्समध्ये पाण्यापेक्षा सेंद्रिय सॉल्व्हेंट्सचा डायलेक्ट्रिक स्थिरांक कमी केला जाऊ शकतो.

3. प्रथिने अवक्षेपण करणारे एजंट: प्रथिने एक अवक्षेपण एजंट म्हणून केवळ एका प्रकारावर किंवा प्रथिनांच्या वर्षाववर कार्य करते, सामान्य म्हणजे अल्कधर्मी, प्रथिने, लेक्टिन आणि जड धातू.

4. पॉलिथिलीन ग्लायकोल पर्जन्य: पाण्यात विरघळणारे नॉन-आयनिक पॉलिमर कसे शुद्ध करावेप्रथिने शुद्धीकरण, जसे की पॉलिथिलीन ग्लायकोल आणि सोडियम डेक्सट्रान सल्फेट प्रथिनांचा अवक्षेप करण्यासाठी.